腎素通過非血管緊張素Ⅱ途徑促進大鼠血管平滑肌細胞鈣化.pdf

1、目的:探討腎素通過非血管緊張素Ⅱ(angiotesinⅡ，AngⅡ)途徑對大鼠血管平滑肌細胞鈣化的影響及其可能的分子機制。
　　 方法:采用組織塊貼壁法培養(yǎng)原代大鼠主動脈平滑肌細胞，利用β-甘油磷酸鈉聯(lián)合丙酮酸鈉制備血管平滑肌細胞鈣化模型。細胞隨機分為6組:即空白對照組（予常規(guī)培養(yǎng)基），鈣化組（予鈣化培養(yǎng)基），鈣化+ AngⅡ受體阻斷劑組（予鈣化培養(yǎng)基，再予Losartan10-6mol/L和PD123，31910-5mol/L

2、分別阻斷AngⅡ受體AT1、AT2)，鈣化+腎素(10-10、10-9、10-8mmol/L)組（于鈣化培養(yǎng)基中，先加入Losartan10-6mol/L和PD123,31910-5mol/L，再分別予10-10、10-9、10-8mmol/L腎素）。用Von Kossa染色鑒定鈣化細胞，測定各組細胞中鈣含量、堿性磷酸酶(ALP)活性判斷鈣化程度。用RT-PCR檢測成骨細胞標志物核結(jié)合因子1(Cbfα1)及轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)

3、 mRNA表達，用Western blotting法測定各組細胞Cbfα1蛋白含量。
　　 結(jié)果:與空白對照組相比，鈣化組鈣含量、ALP活性顯著增加，Cbfα1、TGFβ1mRNA表達和Cbfα1蛋白表達明顯增加（P＜0.01）。與鈣化組相比，鈣化+AngⅡ受體阻斷劑組對鈣化影響無統(tǒng)計學差異。與鈣化+AngⅡ受體阻斷劑組相比，鈣化+腎素（10-10、10-9、10-8mmol/L）組呈腎素劑量依賴地進一步促進大鼠血管平滑肌細胞的