2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、蜘蛛屬節(jié)肢動物門(Arthropoda),是蛛形綱(Arachnoidea)中最大的一類,約36000種,我國已記錄蜘蛛2361種。所有蜘蛛都能紡絲,蜘蛛絲是天然絲纖維中最細(xì)的絲,具有特殊的結(jié)構(gòu),在許多方面都表現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)良品質(zhì),如強(qiáng)度大、彈性好、韌性強(qiáng)、耐沖擊、耐疲勞,而且密度低、抗輻射,具有可濕性、耐火、耐熱、耐低溫,無論是在干燥狀態(tài)還是潮濕狀態(tài)都表現(xiàn)出很好的性能:由于蜘蛛絲是由蛋白質(zhì)構(gòu)成,具有生物可降解性,是可循環(huán)再生的材料,因而

2、對環(huán)境是友好的。 由于蜘蛛具有同類相食的特性,難以密集飼養(yǎng),限制了蜘蛛絲蛋白的廣泛應(yīng)用。因此,通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)大量獲得蜘蛛絲已經(jīng)成為當(dāng)前生物學(xué)研究的主要目標(biāo)。在我國,分布最廣、蛛絲性能極佳的當(dāng)屬大腹圓蛛(Araneusventricosus),雖然已有一些科研人員對其進(jìn)行了研究,但還沒有得到拖絲蛋白編碼基因的全長序列。為了獲得大腹圓蛛拖絲蛋白編碼基因,本論文從以下方面進(jìn)行研究: 首先,通過大量的對比實(shí)驗,建立了適合蜘蛛基因

3、組DNA的提取方法——尿素裂解法。該方法簡單便捷,成本低,無需液氮研磨,可在常溫下進(jìn)行,裂解過程中不形成沉淀,呈懸浮狀,不用顛倒混勻,避免了流體剪切力對高分子量DNA的剪切作用,完整性好,提取的DNA大小遠(yuǎn)在23kb以上,更適合高分子量基因組DNA的提取;DNA得率高,每毫克蜘蛛附肢肌肉可提取出150ng左右的高分子量基因組DNA,無蛋白質(zhì)污染,滿足分子生物學(xué)實(shí)驗的要求。 將提取的基因組DNA隨機(jī)斷裂成約40kb的片段,經(jīng)過末端

4、補(bǔ)齊、5’端磷酸化后,用瓊脂糖凝膠分離、純化,連入CopyControlpCC2FOSTM載體,通過MaxPlaxTMLambdaPackagingExtracts包裝,轉(zhuǎn)入EPI300TM—TlRE.coli,成功構(gòu)建了無偏向性、覆蓋大腹圓蛛全部基因的Fosmid文庫,其包裝滴定度達(dá)8.0×104。根據(jù)已經(jīng)公布的蜘蛛拖絲基因特征序列,設(shè)計并合成了位于拖絲蛋白N端、中間重復(fù)區(qū)和C端的特異性雜交引物,經(jīng)[α-32P]dCTP標(biāo)記后進(jìn)行反復(fù)

5、原位雜交。以中間重復(fù)區(qū)雜交引物重復(fù)雜交2次,在大約4.8×105個菌落中篩選出約1.3×103個陽性克?。辉僖訡端特異性雜交引物對上述1.3×103個陽性克隆進(jìn)行雜交,得到82個清晰的陽性斑;最后,以N端特異性雜交引物在上述結(jié)果中篩選出12個陽性克隆。從理論上講,這12個陽性克隆應(yīng)該含有大腹圓蛛拖絲蛋白的全長編碼基因,雖然雜交存在一定的假陽性,至少會包含部分編碼基因,其它陽性克隆也會含有拖絲蛋白的部分編碼基因。用鳥槍法隨機(jī)測序,得到了4

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