血管緊張素-(1-7)通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對缺氧-復(fù)氧心肌細(xì)胞保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：
　　在細(xì)胞水平探討Ang-(1-7)是否是通過調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑對心肌細(xì)胞H/R損傷起保護(hù)作用的，以及是否是作用于其特異性受體Mas來發(fā)揮此作用的。
　　方法：
　　1.H9C2細(xì)胞培養(yǎng)、傳代、凍存；建立心肌細(xì)胞H/R模型；
　　2.分別給予Ang-(1-7)或（和）A-779干預(yù)，即：（1）Control組：無干預(yù)；（2） H/R組：先缺氧3小時(shí)，再復(fù)氧6小時(shí)；（3）Ang-(1-7)+H/R組：缺氧復(fù)

2、氧前30分鐘給予1000nM Ang-(1-7)孵育，后再缺氧3小時(shí)，復(fù)氧6小時(shí)；（4）Ang-(1-7)+A-779+H/R組：缺氧復(fù)氧前1小時(shí)給予1000nMA-779，缺氧復(fù)氧前30分鐘給予1000nM Ang-(1-7)孵育，后再缺氧3小時(shí)，復(fù)氧6小時(shí)；（5）A-779+H/R組：缺氧復(fù)氧前1小時(shí)給予1000nMA-779，后再缺氧3小時(shí)，復(fù)氧6小時(shí)。
　　3.檢測心肌細(xì)胞凋亡、檢測細(xì)胞上清液心肌酶、檢測心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激

3、相關(guān)指標(biāo)，研究Ang-(1-7)對心肌細(xì)胞缺血再灌損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1.上清液 CK-MB含量(ng/ml）：分別為429.11±260.55、1145.87±58.50、601.94±153.38、1081.88±184.39、1085.65±134.28。與control組相比，H/R組的CK-MB的含量明顯增加（P<0.01），Ang-(1-7)+H/R組的CK-MB的含量增加（P<0.05

4、）， Ang-(1-7)+A-779+H/R組的CK-MB的含量明顯增加（P<0.01），A-779+H/R組的CK-MB的含量明顯增加（P<0.01）；于H/R組相比，Ang-(1-7)+H/R組的CK-MB的含量減少（P<0.05），Ang-(1-7)+A-779+H/R組的CK-MB的含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），A-779+H/R組的CK-MB的含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2. Caspase-3分

5、光光度法檢測細(xì)胞凋亡：各組凋亡細(xì)胞的相對OD值,分別為2.07±0.18、2.66±0.14、2.13±0.09、2.59±0.29、2.59±0.15。與control組相比，H/R組的相對OD值增加（P<0.01），Ang-(1-7)+H/R組的相對OD值增加（P<0.05）， Ang-(1-7)+A-779+H/R組的相對OD值增加（P<0.01），A-779+H/R組的相對OD值增加（P<0.01）；于H/R組相比，Ang-(1

6、-7)+H/R組的相對OD值減少（P<0.05）， Ang-(1-7)+A-779+H/R組的相對OD值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），A-779+H/R組的相對OD值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）
　　3.Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白
　　3.1 Bcl-2蛋白在各組細(xì)胞中的表達(dá)分別為（×10-2）：6.16±0.74、2.21±0.60、3.59±0.38、2.38±0.72、2.41±0.70，與con

7、trol組相比， H/R組的表達(dá)量明顯減少（P<0.01），Ang-(1-7)+H/R組的表達(dá)量減少（P<0.01），Ang-(1-7)+A-779+H/R組的表達(dá)量減少（P<0.01），A-779+H/R組的表達(dá)量減少（P<0.01）；與H/R組相比， Ang-(1-7)+H/R組的表達(dá)量增加（P＜0.05），Ang-(1-7)+A-779+H/R組的表達(dá)量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），A-779+H/R組的表達(dá)量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)

8、意義（P＞0.05）；
　　3.2 Bim蛋白在各組細(xì)胞中的表達(dá)分別為（×10-2）：7.47±0.54、13.02±0.85、10.28±0.74、13.85±2.4、12.58±1.96，與control組相比，H/R組的表達(dá)量增加（P<0.01）， Ang-(1-7)+H/R組的表達(dá)量增加（P＜0.05），Ang-(1-7)+A-779+H/R組的表達(dá)量增加（P<0.01），A-779+H/R組的表達(dá)量增加（P<0.01）；

9、與H/R組相比，Ang-(1-7)+H/R組的表達(dá)量減少（P＜0.05），Ang-(1-7)+A-779+H/R組的表達(dá)量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），A-779+H/R組的表達(dá)量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；
　　4.Western blot檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白
　　4.1 GRP78蛋白在各組細(xì)胞中的表達(dá)分別為（×10-2）：197.57±15.27、258.96±30.29、194.13±18.75、26

10、8.89±24.92、268.13±53.00，與control組相比，H/R組的表達(dá)量增加（P<0.01），Ang-(1-7)+H/R組的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）， Ang-(1-7)+A-779+H/R組的表達(dá)量增加(P<0.01）， A-779+H/R組的表達(dá)量增加(P<0.01）；與 H/R組相比， Ang-(1-7)+H/R組的表達(dá)量減少(P＜0.05），Ang-(1-7)+A-779+H/R組的表達(dá)量的差異無統(tǒng)

11、計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），A-779+H/R組的表達(dá)量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；
　　4.2 CHOP蛋白在各組細(xì)胞中的表達(dá)分別為（×10-2）：23.52±5.68、60.32±11.34、42.57±7.62、63.05±6.65、65.46±4.41，與control組相比，H/R組的表達(dá)量增加（P<0.01）， Ang-(1-7)+H/R組的表達(dá)量增加（P＜0.05），Ang-(1-7)+A-779+H/R組的表

12、達(dá)量增加（P<0.01），A-779+H/R組的表達(dá)量增加（P<0.01）；與H/R組相比，Ang-(1-7)+H/R組的表達(dá)量減少（P＜0.05），Ang-(1-7)+A-779+H/R組的表達(dá)量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），A-779+H/R組的表達(dá)量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；
　　4.3 Caspase12蛋白在各組細(xì)胞中的表達(dá)分別為（×10-2）：46.32±10.12、95.87±13.94、68.71±

13、10.89、84.19±12.24、100.28±14.58，與control組相比，H/R組的表達(dá)量增加(P<0.01）， Ang-(1-7)+H/R組的表達(dá)量增加(P＜0.05）， Ang-(1-7)+A-779+H/R組的表達(dá)量增加(P<0.01）， A-779+H/R組的表達(dá)量增加(P<0.01）；與 H/R組相比， Ang-(1-7)+H/R組的表達(dá)量減少(P＜0.05）， Ang-(1-7)+A-779+H/R組的表達(dá)量的差

14、異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），A-779+H/R組的表達(dá)量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；
　　4.4 JNK蛋白在各組細(xì)胞中的表達(dá)分別為（×10-2）：28.02±6.74、72.07±9.36、48.31±10.05、74.03±18.30、68.74±9.26，與control組相比， H/R組的表達(dá)量增加（P<0.01），Ang-(1-7)+H/R組的表達(dá)量增加（P＜0.05），Ang-(1-7)+A-779+H/R

15、組的表達(dá)量增加（P<0.01），A-779+H/R組的表達(dá)量增加（P<0.01）；與H/R組相比，Ang-(1-7)+H/R組的表達(dá)量減少（P＜0.05），Ang-(1-7)+A-779+H/R組的表達(dá)量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），A-779+H/R組的表達(dá)量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　本課題為國家自然科學(xué)基金“血管緊張素-(1-7)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究（編號：8157027