缺氧-復(fù)氧損傷和離糖濃度對心肌細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用研究.pdf

1、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在細胞內(nèi)具有重要的生理功能,包括負責正確折疊蛋白質(zhì)的合成、轉(zhuǎn)運、信號肽識別和糖基化修飾。然而當內(nèi)質(zhì)網(wǎng)攝取、釋放Ca2+紊亂或者蛋白質(zhì)的加工運輸障礙時,會引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)(endoplasmic reticulum stress,ERS)。研究發(fā)現(xiàn)ERS參與了很多疾病的發(fā)生,如糖尿病、肥胖和腫瘤等,同時還介導(dǎo)心臟缺血／再灌注(ischemic／reperfusion,I／R)損傷。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulat

2、ed protein78kD,GRP78)是應(yīng)激誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)預(yù)留蛋白,被認為是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)的中心調(diào)節(jié)劑,也是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標志蛋白,在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中具有保護細胞DNA免受損傷的作用。本實驗通過觀測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號分子GRP78在蛋白表達水平的變化,以及細胞活性和形態(tài)學的改變,來探討缺氧／復(fù)氧損傷和高糖濃度對心肌細胞所引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用。
　　 目的:觀察大鼠心肌細胞缺氧／復(fù)氧和高糖濃度時內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白表達以及細胞活性的改變及其意義

3、,以探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)與心肌細胞缺血再灌注損傷和糖濃度變化的關(guān)系。
　　 方法:原代培養(yǎng)乳鼠心肌細胞,缺氧6h后復(fù)氧0h、12h制備缺氧復(fù)氧損傷模型,使用葡萄糖濃度為25mmol／L的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h制備高糖損傷模型,1mg／L衣霉素孵育心肌細胞作為本實驗的陽性對照,使用相差倒置顯微鏡觀察心肌細胞搏動狀況,HE染色觀察心肌細胞形態(tài)變化,并用Western blot法檢測GRP78表達水平,并檢測細胞活性。
　　 結(jié)果:缺