過表達(dá)CADM1與IGF-1R抑制劑PPP對(duì)人骨肉瘤U-2OS細(xì)胞抑制作用的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：使用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，探討過表達(dá)腫瘤抑制基因CADM1以及IGF-1R阻滯劑PPP對(duì)人骨肉瘤U-2OS細(xì)胞株起抑癌作用的差異蛋白，為進(jìn)一步蛋白質(zhì)芯片制作、蛋白質(zhì)間相互作用、新藥設(shè)計(jì)的分子靶點(diǎn)研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分過表達(dá)CADM1組與轉(zhuǎn)染空載體組和PPP實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組。
　　1.過表達(dá)CADM1組與轉(zhuǎn)染空載體組：取過表達(dá)CADM1的人骨肉瘤U-2OS-CADM1細(xì)胞株（課題組公開專利201510924952.

2、7，中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏編號(hào)：CCTCC NO：C201518）及轉(zhuǎn)染空載體人骨肉瘤U-2OS細(xì)胞株進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇、擴(kuò)增培養(yǎng)，提取細(xì)胞總蛋白，運(yùn)用雙向電泳技術(shù)鑒定出其中的差異蛋白，并查閱相關(guān)數(shù)據(jù)庫和資料，進(jìn)行對(duì)比分析。
　　2. PPP實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組：取人骨肉瘤U-2OS細(xì)胞株進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇、擴(kuò)增培養(yǎng)。PPP組加入PPP8.0μM（DMSO溶解），對(duì)照組加入等量DMSO，提取細(xì)胞總蛋白質(zhì)，運(yùn)用雙向電泳技術(shù)鑒定出其中的差異蛋白，并

3、進(jìn)行質(zhì)譜分析及查閱相關(guān)數(shù)據(jù)庫和資料，進(jìn)行對(duì)比分析。
　　結(jié)果：1.過表達(dá)CADM1組與轉(zhuǎn)染空載體組細(xì)胞總蛋白，重復(fù)3次進(jìn)行雙向電泳實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)有效分離了細(xì)胞總蛋白，凝膠圖譜背景低，蛋白點(diǎn)清晰可見。雙向電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見蛋白質(zhì)點(diǎn)894±19個(gè)，與空載體對(duì)照株比較，U-2os-CADM1細(xì)胞株有23個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)顯著上調(diào)，21個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)選取了其中12個(gè)顯著性差異表達(dá)的蛋白位點(diǎn)進(jìn)行了質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)分

4、析，其中被成功檢測(cè)的蛋白位點(diǎn)有6個(gè)，分別是：乳酸脫氫酶B鏈（LDHB）、α-烯醇化酶（ENOA）、半乳糖激酶（GALK1）、Ⅱ型細(xì)胞骨架1角蛋白（K2C1）、人組氨酸磷酸酶蛋白（PHP14）、Ⅰ型細(xì)胞骨架9角蛋白（K1C9）。
　　2. PPP實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞總蛋白，重復(fù)3次進(jìn)行雙向電泳實(shí)驗(yàn)，有效分離了細(xì)胞總蛋白，凝膠圖譜背景低，蛋白點(diǎn)清晰可見。雙向電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見蛋白質(zhì)點(diǎn)795±23個(gè)，與對(duì)照組比較，PPP組有25個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)

5、顯著上調(diào)，30個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)選取了其中12個(gè)顯著性差異表達(dá)的蛋白位點(diǎn)進(jìn)行了質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)分析，其中被成功檢測(cè)的蛋白位點(diǎn)有6個(gè)，分別是：巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子（MIF）、D型多巴色素脫羧酶（DDT）、Ⅱ型細(xì)胞骨架1角蛋白（K2C1）、可溶抗藥性相關(guān)鈣結(jié)合蛋白（SRI）、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GSTP1）、黃素還原酶（BLVRB）。
　　結(jié)論：1.實(shí)驗(yàn)成功運(yùn)用雙向電泳、質(zhì)譜分析等蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)成功分

6、離并鑒定：乳酸脫氫酶B鏈（LDHB）、α-烯醇化酶（ENOA）、半乳糖激酶（GALK1）、Ⅱ型細(xì)胞骨架1角蛋白（K2C1）、人組氨酸磷酸酶蛋白（PHP14）、Ⅰ型細(xì)胞骨架9角蛋白（K1C9）6種蛋白在過表達(dá)CADM1組表達(dá)顯著差異，并檢索相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行分析。
　　2.實(shí)驗(yàn)成功運(yùn)用雙向電泳、質(zhì)譜分析等蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)成功分離并鑒定：巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子（MIF）、D型多巴色素脫羧酶（DDT）、Ⅱ型細(xì)胞骨架1角蛋白（K2C1）、可溶抗藥性