IGF-1R抑制劑通過(guò)IGF-1-Snail1信號(hào)通路抑制糖尿病腎病腎小管上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化.pdf

1、目的：
　　研究胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(Insulin-like growth factor1 receptor，IGF-1R)抑制劑對(duì)糖尿病腎?。―iabetic kidney disease，DKD）腎小管上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（Epithelial-to-mesenchymal transition，EMT）的抑制作用，并探討是否通過(guò)調(diào)節(jié)Snail家族鋅指蛋白1（Snail familyzinc finger1 prote

2、in，Snail1）信號(hào)通路發(fā)揮作用。
　　方法:
　　體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：1.30只C57/BL6小鼠，隨機(jī)平均分為5組：①對(duì)照組小鼠普通飼料喂養(yǎng)；②DKD組小鼠高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周，單次腹腔注射鏈尿佐菌素（Streptozocin，STZ）100mg/kg體重，繼續(xù)高脂高糖喂養(yǎng)8周；③IGF-1R組小鼠成模后，給予30mg/(kg·48h) IGF-1R抑制劑灌胃8周；④ACEI組[血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（Angiotensin-

3、converting enzyme inhibitors，ACEI）]小鼠成模后，給予10 mg/(kg·48h)體重貝那普利灌胃8周；⑤胰島素組小鼠成模后，給予皮下注射1-2U/(kg·48h)胰島素8周。2.常規(guī)生化法檢測(cè)血糖、尿肌酐（Urine creatinine，Ucr）、24h蛋白排泄率。3.16周時(shí)麻醉處死小鼠，收集腎組織樣本，常規(guī)石蠟包埋。進(jìn)行組織病理學(xué)檢測(cè)：①過(guò)碘酸希夫（Periodic acid schiff，PAS

4、）染色和天狼星紅（Sirius Red，SR）染色檢測(cè)小鼠腎組織病理變化。②原位雜交和免疫組化分別檢測(cè)腎組織Snail1、IGF-1、E-鈣黏蛋白（E-cadherin，ED-1）和纖維連接蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N）的mRNA和蛋白表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)：1.大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞系（NRK-52E，ATCC? CRL-1571?）分為四個(gè)組：①對(duì)照組腎小管上皮細(xì)胞含5mmol/L glucose的DMEM培養(yǎng)；②高糖組腎小管上皮細(xì)胞

5、含25mmol/L glucose DMEM培養(yǎng)；③NT組腎小管上皮細(xì)胞25mmol/ L glucose DMEM培養(yǎng)48h后25nmol非靶向siRNA干擾；④IGF-1 siRNA組腎小管上皮細(xì)胞25mmol/L glucose DMEM培養(yǎng)48h后25nmol IGF-1 siRNA干擾。2.原位雜交和免疫熒光法分別于相應(yīng)處理48 h和72 h檢測(cè)Snail1、IGF-1、ED-1和FN mRNA和蛋白的表達(dá)。分析數(shù)據(jù)用單因素方

6、差。
　　結(jié)果：
　　體內(nèi)實(shí)驗(yàn):1.與對(duì)照組相比，DKD組小鼠血糖(23.14±2.04 mmol/L vs7.33±0.92 mmol/L)、尿蛋白肌酐比（697.67±168.78μg/mg vs97.69±10.68μg/mg）和尿蛋白排泄率（257±47.56μg/24h vs25±2.44μg/24h）均明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與DKD組相比，IGF-1R組尿蛋白肌酐比（130.89±27.8

7、6μg/mg）和尿蛋白排泄率（93±7.98μg/24h）均明顯下降（P<0.001）；胰島素組血糖（9.65±0.74 mmol/L）、尿蛋白肌酐比（269.40±13.98μg/mg）和尿蛋白排泄率（204±35.98μg/24h）較DKD組亦明顯下降（P<0.05）2.對(duì)照組小鼠腎小管上皮細(xì)胞彼此緊密相連，排列整齊，基底膜完整，腎小管間質(zhì)未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和膠原纖維沉積。DKD組腎小管肥大增生、腎小管上皮損傷、腎小管結(jié)構(gòu)破壞，間質(zhì)見(jiàn)

8、多量膠原纖維沉積（P<0.01）。與DKD組比較，IGF-1R組腎小管結(jié)構(gòu)基本完整，肥大程度明顯減輕，間質(zhì)膠原沉積量明顯減少（P<0.01），ACEI組和胰島素組變化無(wú)顯著差異（P>0.05）。3.與對(duì)照組相比，DKD組小鼠腎組織中IGF-1、Snail1和FN的mRNA及蛋白表達(dá)明顯增加（P<0.05），ED-1的mRNA及蛋白表達(dá)明顯減少（P<0.05）；與DKD組相比，IGF-1R組Snail1和FN的mRNA及蛋白表達(dá)明顯減少（

9、P<0.05），ED-1的mRNA及蛋白表達(dá)明顯增加。體外實(shí)驗(yàn)：1. IGF-1的沉默效率為61.1%；2. DKD組腎小管上皮細(xì)胞IGF-1、Snail1、FN和ED-1的mRNA及蛋白表達(dá)趨勢(shì)同 DKD組小鼠組織一致。3.與高糖組相比，IGF-1siRNA組Snail1的mRNA及蛋白表達(dá)明顯下降（均P<0.01），F(xiàn)N的mRNA及蛋白表達(dá)明顯減少（P<0.05），ED-1的mRNA及蛋白表達(dá)明顯增加。
　　結(jié)論：