KCNQ1在尿酸鹽晶體引起單核巨噬細胞分泌IL-1β中的作用研究.pdf

1、目的：探討鉀離子通道蛋白KCNQ1在尿酸鹽晶體刺激人單核巨噬細胞分泌IL-1β中可能的作用。
　　方法：以濃度為60μg/ml的丙二醇甲醚醋酸酯（Phorbol-12-myristate-13-acetate，PMA）誘導(dǎo)人急性單核細胞白血病細胞系(human acute monocytic leukemia cell line，THP-1)，誘導(dǎo)時間為72h，得到人單核巨噬細胞。熒光定量PCR檢測人單核巨噬細胞中KCNQ1輔基K

2、CNE1是否表達，及相對于KCNQ1的表達量。將實驗分成4組：對照組、尿酸鹽晶體組、尿酸鹽晶體和通道激活劑（ML-277,20nmol/ml）組、尿酸鹽晶體和通道阻滯劑（Chromanol293B,100nmol/ml）組。各實驗組中尿酸鹽晶體的量均為：100μg/ml。在每組加入相應(yīng)阻滯劑或抑制劑預(yù)處理30min后，期間每10分鐘晃動一次，以保持作用充分。之后，實驗組加入等量尿酸鹽晶體。6h后，應(yīng)用ELISA法檢測上清液中成熟IL-1

3、β的濃度，應(yīng)用熒光定量PCR檢測細胞內(nèi)IL-1β前體、IL-18前體、TNF-α的表達量。刺激2h后，去上清,用10%的硝酸溶解消化細胞，應(yīng)用原子吸收分光光度計檢測每孔細胞內(nèi)鉀離子的量；應(yīng)用ATP試劑盒檢測細胞內(nèi)ATP的濃度。
　　結(jié)果：輔基KCNE1在該細胞中同時表達，且表達量明顯高于KCNQ1.尿酸鹽晶體刺激6h后，上清液中成熟IL-1β的濃度，通道激活劑組與尿酸鹽晶體組相比明顯升高（P＜0.01），而該通道阻滯劑組與尿酸鹽晶

4、體組相比無明顯差異。細胞內(nèi)IL-1β前體、IL-18前體、TNF-α表達量，各實驗組間無明顯差異。尿酸鹽晶體刺激2h后，細胞內(nèi)鉀離子濃度，激活劑組與尿酸鹽晶體組相比，細胞內(nèi)鉀離子濃度進一步下降（P＜0.01），阻滯劑組略高于尿酸鹽晶體組，但在目前實驗條件下，我們沒有觀察到這一差異的統(tǒng)計學意義。實驗組細胞內(nèi)ATP的含量明顯低于對照組，各實驗組之間無明顯差異。
　　結(jié)論：1.正常狀態(tài)下，KCNQ1鉀離子通道在尿酸鹽晶體刺激人單核巨噬細