辛伐他汀對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞合成及分泌MCP-1、IL-1及IL-6的抑制作用.pdf

1、目的：動(dòng)脈粥樣硬化是動(dòng)脈壁的一種慢性炎癥性疾病，它的形成是血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、單核細(xì)胞與炎癥介質(zhì)相互作用的結(jié)果，以粥樣斑塊中出現(xiàn)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞為特征。血管內(nèi)皮細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用。血管內(nèi)皮細(xì)胞直接接觸血液，血液中的異常物質(zhì)可直接影響內(nèi)皮細(xì)胞，如氧化低密度脂蛋白等。血管內(nèi)皮細(xì)胞受到刺激后，可分泌多種細(xì)胞因子，促進(jìn)白細(xì)胞粘附、血管平滑肌細(xì)胞增殖及遷移等。相當(dāng)多的證據(jù)表明，在動(dòng)脈粥樣硬化損害

2、形成的最早期可檢測到的細(xì)胞反應(yīng)之一即是局部單核細(xì)胞活化、募集和粘附，加劇炎癥反應(yīng)，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。
　　 脂多糖屬于促炎癥細(xì)胞因子，可刺激內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞釋放一系列炎癥介質(zhì)NO、趨化因子、氧自由基、細(xì)胞因子、前列腺素等，這些炎癥介質(zhì)通過自分泌或旁分泌等途徑促使細(xì)胞損傷，內(nèi)皮細(xì)胞間隙增大，血管基膜暴露，中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等遷移內(nèi)皮下，加劇炎癥反應(yīng)。
　　 他汀類藥物屬于3-羥-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMG-

3、CoA)抑制劑，可以降低血清膽固醇的含量，是治療動(dòng)脈粥樣硬化的常用藥。近年來研究表明，他汀類藥物不僅依靠其降脂作用，還通過多種其他藥理作用，如改善血管內(nèi)皮功能、促進(jìn)纖溶、抗血栓形成等，顯著減少動(dòng)脈粥樣硬化病變及單核細(xì)胞的核因子KB（NF-KB）的活性，降低心血管疾病的發(fā)病率和死亡率。但是目前針對辛伐他汀對血管內(nèi)皮減輕炎癥反應(yīng)的機(jī)制尚不明確。
　　 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用脂多糖作為炎癥刺激物，辛伐他汀作為保護(hù)藥物，觀察MCP-1、白介素-1(

4、IL-I)及白介素-6(IL-6)在脂多糖激活的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)變化，以及辛伐他汀對其表達(dá)的影響。
　　 方法：(1)細(xì)胞培養(yǎng)：取新鮮臍帶，分離人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，培養(yǎng)，鑒定，傳代，取第3代細(xì)胞用來實(shí)驗(yàn)。(2)細(xì)胞分組：隨機(jī)分為空白對照組、LPS(100 ng/mL)組、辛伐他汀(5 ug/mL)組、辛伐他汀(5u/mL)和LPS(100 ng/mL)共作用組。(3)吸取細(xì)胞上清液后用ELISA檢測上清液中IL-1、IL-

5、6及MCP-1蛋白的表達(dá)。(4)收集細(xì)胞，分別抽取Mrna，反轉(zhuǎn)錄Cdna，進(jìn)行熒光實(shí)時(shí)定量PCR，用GAPDH、18S Rrna和CYC三個(gè)基因作內(nèi)參，檢測IL-1、IL-6及MCP-1的Mrna表達(dá)。上述實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：(1)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞鑒定結(jié)果：相差顯微鏡下，內(nèi)皮細(xì)胞呈單層生長，形態(tài)為多角形，長滿時(shí)呈典型的鵝卵石狀鑲嵌排列；免疫細(xì)胞化學(xué)顯示內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子相關(guān)抗原顯色陽性。(2)Elisa:與

6、對照組相比，LPS組細(xì)胞的上清液中IL-1、MCP-1及II,-6蛋白的表達(dá)均明顯增加(P均<0.01）；與LPS組相比，辛伐他汀和LPS共作用組的上清液中IL-I、MCPol及IL-6蛋白的表達(dá)均明顯降低(P均