2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景:
  痛風和高尿酸血癥是嘌呤代謝紊亂所引起的疾病,高尿酸血癥是痛風發(fā)生的病理生理基礎。隨著近年生活水平的提高,全球范圍內(nèi)痛風的發(fā)生率伴隨高尿酸血癥的患病率升高而攀升。組織病理學顯示,痛風是一種先天性和適應性免疫細胞參與的、由尿酸單鈉結(jié)晶局部沉積引起的復雜組織炎癥反應。單核/巨噬細胞在痛風、肥胖、動脈粥樣硬化等代謝性疾病中發(fā)揮重要的作用。環(huán)氧化酶-2(COX-2)和核因子NF-κB是調(diào)節(jié)單核/巨噬細胞炎癥反應的經(jīng)典途徑。高尿酸

2、血癥是代謝綜合征群的一部分,不僅可以引起痛風,通常還伴隨著腹型肥胖、糖耐量受損、胰島素抵抗、血脂異常及高血壓,但其相互關(guān)系及內(nèi)在機制不甚明了。高尿酸血癥可直接參與糖脂代謝紊亂、內(nèi)皮細胞損傷、腎損傷、炎癥等重要病理生理過程。高尿酸(high uric acid,HUA)可誘導多種細胞的氧化應激。我們前期發(fā)現(xiàn)高尿酸直接抑制細胞胰島素信號誘導胰島素抵抗產(chǎn)生,并通過激活磷酸腺苷激活蛋白酶(AMP activated protein kinase

3、,AMPK),抑制胰島β細胞的增殖和胰島素分泌。已有研究指出AMPK可有效負調(diào)控巨噬細胞炎性功能和促進其向抗炎表型極化。研究已證實尿酸結(jié)晶引起單核/巨噬細胞參與的炎癥反應,其分子機制有待進一步明確;高尿酸對單核/巨噬細胞的影響及其內(nèi)在機制尚不清楚。
  目的:
  探討尿酸結(jié)晶和高尿酸對單核/巨噬細胞的不同作用,著重研究尿酸結(jié)晶和高尿酸對單核/巨噬細胞炎癥反應及炎癥表型分化的影響,闡明其中的分子機制,為單核/巨噬細胞參與高尿

4、酸血癥相關(guān)疾病的病理過程提供證據(jù)。
  方法:
  1.收集痛風病例(31例)及病理組織標本(29例),觀察單核/巨噬細胞在血液和病理組織中的數(shù)量變化,并用免疫組化方法檢測痛風病理組織中的CD68和NF-κB(p65)表達。
  2.用含10%胎牛血清的RMPI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人單核細胞株THP-1細胞。分化的THP-1細胞經(jīng)尿酸結(jié)晶(0.5mg)、LPS(100ng/ml)、HUA(15mg/dl)、PBS或者溶

5、劑(Vehicle)處理8h后,應用蛋白免疫印跡(Western Blot)方法檢測COX-2和NF-κB(p65)的表達。ELISA方法檢測細胞培養(yǎng)上清中的TNF-α分泌。
  3. THP-1細胞經(jīng)HUA(15mg/dl)溶液作用0、30、60和120min后,Western Blot檢測AMPK磷酸化水平。
  4.倒置熒光顯微鏡觀察和流式細胞儀檢測:空白組、Vehicle組、HUA組、HUA+10NAC組、HUA+2

6、0NAC組和NAC組細胞內(nèi)的活性氧水平。
  5. Western Blot檢測:空白組、Vehicle組、HUA組、HUA+10NAC組、HUA+20NAC組和NAC組的氧化應激對AMPK磷酸化水平的影響。
  6. Western Blot和流式細胞術(shù)檢測:未處理組、HUA組、PMA組、HUA+PMA組、HUA+PMA+Compound C組和PMA+Compound C組細胞內(nèi)的CD68表達。
  結(jié)果:

7、  1.痛風患者血象單核細胞比例未見異常,但痛風病理組織局部出現(xiàn)巨噬細胞聚集。
  2.尿酸結(jié)晶刺激THP-1細胞的NF-κB(p65)和COX-2表達增加。
  3.尿酸結(jié)晶刺激THP-1細胞分泌細胞因子TNF-α。
  4.高尿酸增加THP-1細胞氧化應激,激活AMPK信號途徑。
  5.高尿酸通過AMPK激活抑制THP-1細胞分化過程中的CD68表達。
  6.高尿酸不影響THP-1細胞的NF-κB(

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