β腎上腺素能受體在輸尿管ICC細(xì)胞上的表達(dá)及其功能研究.pdf

1、背景及目的：
　　 Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitiAlcells of cajal,ICC)是首先在消化道中被發(fā)現(xiàn)，分布在自主神經(jīng)末梢和平滑肌細(xì)胞之間一種特殊間質(zhì)細(xì)胞。研究表明，ICC細(xì)胞可以起搏胃腸道基本電節(jié)律(basic electricAlrhythm, BER)，其突起形成的網(wǎng)絡(luò)能夠傳播BER；ICC細(xì)胞還可作為壁內(nèi)神經(jīng)信息向平滑肌傳送的中轉(zhuǎn)站，并對(duì)有關(guān)信號(hào)起整合作用，尤其在調(diào)節(jié)NO依賴(lài)性的神經(jīng)遞質(zhì)方面起重要作

2、用。隨著對(duì)ICC細(xì)胞研究的深入，Smet等在豚鼠和人的膀胱上發(fā)現(xiàn)了ICC細(xì)胞，接著又在人和動(dòng)物的輸尿管、腎盂等多個(gè)部位也發(fā)現(xiàn)了ICC細(xì)胞。同時(shí)，Ross等通過(guò)免疫組化發(fā)現(xiàn)泌尿系ICC細(xì)胞與神經(jīng)聯(lián)系緊密，并可能參與神經(jīng)元對(duì)平滑肌的調(diào)控。
　　 自主神經(jīng)系統(tǒng)在輸尿管的收縮和舒張運(yùn)動(dòng)中起到了重要的作用，交感神經(jīng)可以通過(guò)α受體和β受體來(lái)分別引起輸尿管的收縮和舒張，膽堿能神經(jīng)通過(guò)作用于毒蕈堿受體來(lái)調(diào)控輸尿管的收縮。交感神經(jīng)分泌的腎上腺素能

3、神經(jīng)遞質(zhì)能夠作用于β腎上腺素能受體，從而引起輸尿管的舒張。Β受體可以分成β1、β2和β3 三個(gè)亞型，在很多哺乳動(dòng)物的輸尿管上，存在β腎上腺素能受體亞型的分布，比如狗的輸尿管表達(dá)β3、大鼠的輸尿管表達(dá)β1、兔子的輸尿管表達(dá)β2、豚鼠只表達(dá)β3，而人可以表達(dá)β1、β2和β3，腎上腺素能神經(jīng)遞質(zhì)作用于相關(guān)β受體亞型后，可以降低輸尿管的收縮力和改變輸尿管的收縮形式，在輸尿管的舒張運(yùn)動(dòng)中起到重要作用。
　　 在胃腸道中，ICC細(xì)胞可以表達(dá)

4、多種神經(jīng)受體，如嘌呤能受體、膽堿能、緩激肽受體和前列腺素受體。我們前期研究表明，輸尿管ICC細(xì)胞膜上表達(dá)膽堿能受體并且參與了膽堿能神經(jīng)對(duì)輸尿管收縮的調(diào)控。那么，輸尿管ICC細(xì)胞是否表達(dá)β腎上腺素能受體并參與腎上腺素能神經(jīng)對(duì)輸尿管運(yùn)動(dòng)的調(diào)控？目前國(guó)內(nèi)外還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。
　　 本研究通過(guò)免疫熒光染色的方法直接觀(guān)察ICC細(xì)胞上β腎上腺素受體亞型的表達(dá)情況；以及通過(guò)測(cè)定豚鼠輸尿管肌條興奮性和收縮性的方法，觀(guān)察Glivec 特異性阻斷IC

5、C細(xì)胞后，對(duì)β腎上腺素能受體激動(dòng)劑舒張輸尿管肌條功能的影響，來(lái)研究輸尿管ICC細(xì)胞在輸尿管收縮和舒張功能調(diào)節(jié)中的作用。從而，初步探討輸尿管ICC細(xì)胞在腎上素能神經(jīng)遞質(zhì)傳遞中的作用，結(jié)果有助于進(jìn)一步闡明輸尿管神經(jīng)調(diào)控機(jī)制，為輸尿管收縮和舒張功能異常的研究提供新的切入點(diǎn)。
　　 方法：
　　 本課題以成年豚鼠為研究對(duì)象。（1）形態(tài)學(xué)觀(guān)察：采用免疫熒光染色法，在激光共聚焦顯微鏡下觀(guān)察輸尿管ICC細(xì)胞上β腎上腺素受體亞型（β1、

6、β2和β3）的表達(dá)；
　　 （2）功能學(xué)研究：在體外，運(yùn)用肌條實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)比實(shí)驗(yàn)組（阻斷了ICC細(xì)胞的肌條）和對(duì)照組（正常豚鼠肌條）在β受體激動(dòng)劑作用下興奮性及收縮性的變化，來(lái)研究ICC細(xì)胞上β腎上腺素受體的功能以及ICC細(xì)胞對(duì)β腎上腺素受體的功能的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.激光共聚焦顯微鏡下觀(guān)察顯示，豚鼠輸尿管內(nèi)可見(jiàn)c-kit 染色陽(yáng)性的輸尿管ICC細(xì)胞。
　　 2.輸尿管ICC細(xì)胞表達(dá)β3 受體

7、，未見(jiàn)β1、β2 受體表達(dá)。
　　 3.在一定前負(fù)荷下(2.0g)，輸尿管肌條出現(xiàn)自發(fā)性收縮，CGP12177(選擇性β3 受體激動(dòng)劑)可引起自發(fā)性收縮振幅顯著降低，自發(fā)性收縮頻率減慢；表明β3 受體激動(dòng)劑能夠?qū)﹄嗍筝斈蚬墚a(chǎn)生舒張效應(yīng)。
　　 4.Glivec 阻斷輸尿管ICC細(xì)胞后，CGP12177對(duì)輸尿管肌條的自發(fā)性收縮的舒張效應(yīng)減弱；表明ICC細(xì)胞能夠影響輸尿管β3 受體的舒張功能。
　　 5. 異丙腎上腺

8、素能夠引起肌條的舒張；Glivec 阻斷輸尿管ICC細(xì)胞后，異丙腎上腺素對(duì)輸尿管肌條的自發(fā)性收縮的舒張效應(yīng)亦減弱?？梢?jiàn)，ICC細(xì)胞參與了異丙腎上腺素對(duì)輸尿管的舒張作用，即表明ICC細(xì)胞可能參與腎上腺素能神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)輸尿管的舒張作用，并可能介導(dǎo)腎上腺素能神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞。
　　 結(jié)論：
　　 1．豚鼠輸尿管ICC細(xì)胞上表達(dá)腎上腺素能β3 受體。
　　 2．激動(dòng)ICC細(xì)胞上β3 受體能夠引起輸尿管舒張。
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