微測序法檢測Y-SNP和mt-SNP的研究.pdf

1、目的 單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymoq hism SNP)是人類基因組中最常見的一種變異，其中Y染色體非重組區(qū)及線粒體上SNP在遺傳過程中不發(fā)生重組，分別呈父系和母系遺傳，因而建立高通量的檢測方法檢測SNP是對現(xiàn)有法醫(yī)學(xué)STR檢測手段的必要補(bǔ)充。本課題旨在建立一種復(fù)合Y-SNP和mt-SNP位點(diǎn)的快速檢測方法，通過群體遺傳學(xué)研究獲得四川地區(qū)人群12個Y-SNP及7個mt-SNP位點(diǎn)遺傳學(xué)資料，并探討其

2、在法醫(yī)學(xué)案件檢驗(yàn)中的應(yīng)用。 方法 采用商品試劑SNaPshot對SNP位點(diǎn)進(jìn)行復(fù)合PCR和復(fù)合微測序檢測分析。選擇了文獻(xiàn)資料中曾在其他種族中報(bào)道過的SRY2627、SRYl532、M13、M20、SRY8299、Tat、M69、M9、92R7、M112、M17、M19等12個Y-SNPs位點(diǎn)和4216、7028、10398、10400、12308、12705、14766等7個mt-SNP進(jìn)行研究。 具體方法是：(1)對1

3、2個Y-SNP和7個mt-SNP所在的片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增；(2)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物純化處理后作為模板用商品試劑盒進(jìn)行微測序反應(yīng)；(3)經(jīng)毛細(xì)管電泳儀對微測序反應(yīng)的產(chǎn)物進(jìn)行檢測。 結(jié)果應(yīng)用多個Y-SNP和mt-SNP的復(fù)合擴(kuò)增及復(fù)合微測序方法對四川地區(qū)人群78例無關(guān)男性個體的12個Y-SNP位點(diǎn)的檢測中發(fā)現(xiàn)3種單倍型，在85個無關(guān)個體的7個mt-SNP檢驗(yàn)中得到4種單倍型。此方法對12個Y-SNP和7個mt-SNP的法醫(yī)學(xué)可行性研究表

4、明這些SNP位點(diǎn)具有種屬特異性、組織同一性，而且模板DNA為0.5ng時仍然可以檢出。應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)實(shí)際案件中，Y-SNP在混合斑的檢測中可以得到準(zhǔn)確的男性特異性分型，而mt-SNP檢驗(yàn)則能對極微量的模板DNA進(jìn)行檢測。 結(jié)論本研究建立了同一體系中對多個SNP進(jìn)行復(fù)合PCR反應(yīng)及微測序檢測的方法，結(jié)果證實(shí)，這是一種準(zhǔn)確、高靈敏度和穩(wěn)定可靠的SNP檢測方法。應(yīng)用SNaPshot試劑盒和熒光檢測系統(tǒng)，可進(jìn)行多樣本的多個Y-SNP和mt