Grp75細(xì)胞保護(hù)效應(yīng)的機(jī)制研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白75是細(xì)胞內(nèi)的一種重要的分子伴侶,體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)證實(shí)在缺血反應(yīng)中g(shù)rp75都呈上調(diào)表達(dá),為了探討PC12細(xì)胞缺糖反應(yīng)中g(shù)rp75的表達(dá)變化及其意義,該文應(yīng)用RT-PCR、蛋白印跡雜交、免疫細(xì)胞化學(xué)等方法研究了grp75的表達(dá)變化,并構(gòu)建了grp75的過(guò)表達(dá)和低表達(dá)的PC12細(xì)胞模型,用臺(tái)盼藍(lán)拒染法(typan blue exclusion)和MTT法檢測(cè)了不同細(xì)胞模型在缺糖培養(yǎng)后的細(xì)胞活力,同時(shí)對(duì)不同PC12細(xì)胞模型的ATP、

2、ROS以及線粒體跨膜電位的變化進(jìn)行檢測(cè).結(jié)果表明grp75在PC12細(xì)胞缺糖后3小時(shí)就開(kāi)始持續(xù)性上升,在24小時(shí)后達(dá)到最高峰.grp75的低表達(dá)模型在缺糖培養(yǎng)后的細(xì)胞活力與對(duì)照組細(xì)胞沒(méi)有顯著性差異,而grp75的過(guò)表達(dá)模型則對(duì)PC12細(xì)胞的缺糖損傷表現(xiàn)出明顯的保護(hù)效應(yīng);grp75過(guò)表達(dá)模型在缺糖損傷過(guò)程中ATP的變化與對(duì)照組沒(méi)有顯著的差異,grp75的過(guò)表達(dá)同樣也沒(méi)有對(duì)缺糖過(guò)程中的線粒體跨膜電位的變化產(chǎn)生影響,但是grp75的過(guò)表達(dá)能夠

3、顯著地抑制缺糖后ROS的產(chǎn)生,表明抑制ROS的產(chǎn)生是grp75的細(xì)胞保護(hù)作用的可能機(jī)制之一.缺糖損傷會(huì)引起細(xì)胞內(nèi)一系列基因表達(dá)的變化,這些基因的表達(dá)對(duì)受損細(xì)胞的命運(yùn)起著至關(guān)重要的作用,而其中引人注目的基因包括bcl-2家族的基因、p53基因等調(diào)控細(xì)胞存活或死亡的基因.為了闡明P53、bcl-2、bax在PC12缺糖損傷過(guò)程中的表達(dá)變化及其與grp75過(guò)表達(dá)之間的關(guān)系,該文用RT-PCR的方法檢測(cè)了PC12細(xì)胞損傷過(guò)程中bcl-2、bax

4、的表達(dá)變化,同時(shí)蛋白印跡檢測(cè)了p53蛋白的表達(dá)量,對(duì)比了grp75過(guò)表達(dá)的PC12細(xì)胞和對(duì)照組細(xì)胞中p53蛋白的變化過(guò)程,最后用免疫共沉淀的方法檢測(cè)grp7575蛋白是否與p53蛋白有直接的細(xì)胞內(nèi)作用.結(jié)果bcl-2基因在缺糖開(kāi)始后上調(diào)表達(dá),12小時(shí)后表達(dá)量最高,然后開(kāi)始下降;bax基因則在缺糖的刺激下表達(dá)量持續(xù)下降;p53蛋白在缺糖后3小時(shí)表達(dá)量開(kāi)始上升,到9小時(shí)達(dá)到最大值;grp75的過(guò)表達(dá)延遲了P53基因上調(diào)表達(dá)的時(shí)間;免疫共沉淀

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