熒光相關光譜均相免疫新方法研究.pdf

1、免疫分析是利用抗原與抗體之間高特異性的反應實現(xiàn)對抗體、抗原或相關物質(zhì)進行檢測的分析方法。免疫分析是一種非常重要的生物分析方法,它被廣泛地應用于臨床診斷,食品和環(huán)境分析,生物及醫(yī)學研究等領域。目前免疫分析主要以微孔板為實驗平臺的異相分析模式。這種方法需要包埋、沖洗等多步操作。因此,這種方法操作繁瑣,分析時間長,不能滿足某些快速檢測和診斷的要求。近年來,均相免疫分析以其快速便捷的操作和低廉的成本,受到越來越多的關注。然而,由于這種方法的靈敏

2、度較低,不能滿足高背景噪音的臨床檢測要求。
　　本文旨在利用貴金屬納米顆粒合成生物探針,并結合熒光相關光譜,發(fā)展了一種高靈敏的均相免疫分析新方法。主要研究工作包括如下兩個方面:1、銀納米顆粒(SNP)具有很強的共振散射光,并對熒光染料有信號增強的效果,是性能優(yōu)良的標記分子。但是其在均勻性與穩(wěn)定性上的劣勢阻礙了它的應用。
　　本文采用巰基十一烷基酸(MUA)對銀納米顆粒進行了表面修飾,有效地改善了它的均勻性與穩(wěn)定。并通過控制抗

3、體與銀納米顆粒的物質(zhì)的量比例(2:1與10:1),實現(xiàn)了銀納米顆粒的生物連接,合成了低抗體-銀納米結合物與高抗體-銀納米結合物。同時,本文還利用共振光散射相關光譜(RLSCS),對銀納米顆粒及其表面修飾和生物連接過程進行了表征研究,并優(yōu)化了實驗條件。通過與其他表征結果的比較,證明RLSCS是一種表征銀納米顆粒的有效的單分子檢測手段。2、本文選擇甲胎蛋白抗原(AFP)與其抗體(AFP1A6)作為實驗模型進行均相免疫研究,并利用Alexa

4、Fluor647標記的AFP作為均相競爭免疫的示蹤抗原。低抗體-銀納米結合物和高抗體-銀納米結合物分別與抗原進行免疫反應而成的免疫復合物,同自由的染料標記抗原相比,擴散時間分別增加了60倍(低抗體銀納米探針)與120倍(高抗體銀納米探針)。同時,這些免疫產(chǎn)物的熒光強度分別增加了18倍與49倍,信噪比也增加了10倍與20倍?；阢y納米顆粒在熒光增強與擴散時間增加上的作用,本文結合雙組分熒光相關光譜,發(fā)展了納米銀增強熒光相關光譜均相競爭免疫

5、分析方法。在優(yōu)化的條件下,這種方法具有良好的靈敏度,其檢測限為1.5 pM,線性范圍從6 pM至60 pM(R＞0.99)。在人體血清AFP水平的測試中,檢測的相對標準偏差(RSD)約為5％,回收率大于90%。從而實現(xiàn)了均相免疫在實體生物樣品中應用的目標。綜上所述,利用納米銀增強熒光相關光譜方法進行的免疫分析,不僅能夠提高抗原與免疫結合物的區(qū)分度,而且能夠顯著的增加免疫分析的靈敏度。這一技術必將在臨床診斷、食品與環(huán)境分析以及生物和生物醫(yī)