Hedgehog信號通路在大鼠急性胰腺炎中的作用及其對TNF-α、IL-10的影響.pdf

1、急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)是臨床常見急腹癥，具有起病急、病情重、變化快等特點，除了胰腺本身病變之外，還可能引起胰腺外器官和組織的損傷，甚至最終或可誘發(fā)全身炎癥反應綜合征(systemicinflammatory response syndrome，SIRS)、多器官功能障礙綜合征(multiple-organ dysfunction syndrome，MODS)等而導致死亡。目前，關于AP發(fā)生發(fā)展機制的研究

2、很多，細胞內(nèi)信號通路即為其中重要的一個方面。大量研究發(fā)現(xiàn)，Hedgehog(Hh)信號通路作為細胞內(nèi)信號通路的新熱點，不僅在動物胚胎發(fā)育、細胞分化增殖、器官發(fā)育調(diào)節(jié)等生理過程中發(fā)揮著重要作用，還與許多疾病的發(fā)生發(fā)展有著直接的關系。但是，目前Hh信號通路與疾病間關系的研究大多集中在其異常激活所導致的惡性腫瘤疾病中，如胰腺癌、胃癌、卵巢癌等，而與炎癥性疾病的研究則相對較少。故本研究擬初步探討Hh信號通路在AP中的作用及其可能的機制。

3、　　目的:
　　本研究應用Hh信號通路的特異性激動劑Purmorphamine預處理大鼠AP模型，并通過監(jiān)測Hh信號通路對血清中淀粉酶(Amylase，AMY)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-10(interleukin-10，IL-10)的水平的影響，初步探討Hh信號通路的激活對大鼠AP的作用，并研究其可能的機制。
　　方法:
　　1、實驗分組:54只清潔級成

4、年雄性SD大鼠，體重220±20 g，隨機分為正常對照組(N組，n=18)、急性胰腺炎組(AP組，n=18)、Purmorphamine干預組(Pur組，n=18)，每組再以不同時間點6h、12h、24h分為三個亞組，每個亞組6只大鼠。
　　2、制造模型:本研究采用L-精氨酸腹腔注射法制造大鼠AP模型。
　　AP組給予腹腔注射20％ L-精氨酸2.5 g/kg，間隔1h注射2次，N組則給予等體積的生理鹽水腹腔注射2次。Pur

5、組于造模前1h給予Purmorphamine溶液0.69 mg/kg腹腔注射1次，另兩組給予等體積的DMSO溶液腹腔注射1次。最后一次腹腔注射后，分別于6h、12h、24 h處死各組大鼠，留取血清及胰腺組織。
　　3、實驗方法:應用淀粉酶試劑盒檢測血清中淀粉酶(amylase，AMY)水平，利用ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)方法檢測血清中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosi

6、s factor-α，TNF-α)及白細胞介素-10(interleukin-10，IL-10)水平，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(real-timepolymerase chain reaction，Real-time PCR)測定胰腺組織中Ptch1 mRNA表達水平。
　　4、統(tǒng)計學方法:應用SPSS22.0軟件包進行統(tǒng)計學處理，P＜0.05認為具有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1、血清AMY:在各時間點，N組血

7、清AMY水平較低且無顯著變化;AP組及Pur組各時間點AMY水平較N組均顯著升高（P＜0.05），且隨時間延長而逐漸上升;與AP組相比，Pur組各時間點血清AMY水平則明顯下降(P＜0.05）。
　　2、血清TNF-α:N組血清TNF-α在各時間點均無顯著變化，且水平較低;與之相比，AP組和Pur組血清TNF-α水平都出現(xiàn)了明顯升高(P＜0.05);但Pur組與AP組相比，血清TNF-α水平則顯著降低(P＜0.05)。
　　

8、3、血清IL-10:N組血清IL-10水平在各時間點均較低;AP組和Pur組分別與N組比較，各時間點血清IL-10均顯著升高（P＜0.05）;應用Purmorphamine干預后，Pur組血清IL-10較AP組在各時間點均顯著升高（P＜0.05）。
　　4、胰腺組織Ptch1 mRNA:在各時間點，N組胰腺Ptch1 mRNA均未見明顯表達;AP組和Pur組分別與N組比較，Ptch1 mRNA水平均顯著升高(P＜0.05），且隨時

9、間呈上升趨勢;由于Purmorphamine的作用，Pur組各時間點Ptch1 mRNA水平較AP組均進一步明顯升高(P＜0.05）。
　　5、AP組及Pur組兩組中不同指標間的相關性檢驗:將血清TNF-α與血清AMY進行相關性分析，二者呈正相關，相關系數(shù)r=0.704(P＜0.01);將血清IL-10與血清AMY進行相關性分析，二者呈負相關，相關系數(shù)r=-0.429（P＜0.01）;將血清IL-10與血清TNF-α進行相關性分析

10、，二者呈負相關，相關系數(shù)r=-0.463(P＜0.01);將胰腺組織Ptch1 mRNA與血清IL-10進行相關性分析，二者呈正相關，相關系數(shù)rs=0.700(P＜0.01);將胰腺組織Ptch1mRNA與血清TNF-α進行相關性分析，結果提示二者并無相關性(rs=-0.129，P=0.454＞0.01)。
　　結論:
　　1、應用L-精氨酸腹腔注射方法可成功復制大鼠AP模型，為研究Hh信號通路在大鼠AP中的作用提供了條件。

11、
　　2、AMY是反應急性胰腺炎炎癥的重要指標，給予外源性Hh信號通路激動劑Purmorphamine后，可引起大鼠AP模型血清AMY水平明顯下降，胰腺損害減輕，促進急性胰腺炎的恢復。
　　3、TNF-α作為關鍵性的促炎因子，在AP發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，其水平可直接反應炎癥嚴重程度;抗炎因子IL-10則可通過降低血清AMY、抑制包括TNF-α在內(nèi)的炎癥因子等方式在AP的進展中起保護作用。
　　4、應用外源性Hh信號通