CUEDC2對急性胰腺炎腺泡細(xì)胞TNF-α、IL-6的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是臨床常見急腹癥,具有起病急、病情重、變化快等特點(diǎn),除了胰腺本身病變之外,還可能引起胰腺外器官和組織的損傷,甚至最終誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)、多器官功能障礙綜合征(multiple-organ dysfunction syndrome,MODS)等而導(dǎo)致死亡。盡管在過去的幾十年里急性胰腺炎的研

2、究取得明顯進(jìn)展,但是其發(fā)病機(jī)制仍較復(fù)雜。急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)無論病因如何,損傷的胰腺會引起胰酶的自身消化,同時作為炎癥刺激物刺激單核巨噬細(xì)胞及胰腺腺泡細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子,觸發(fā)炎癥介質(zhì)形成瀑布樣級聯(lián)反應(yīng),最終會導(dǎo)致局部或全身炎癥反應(yīng)。CUEDC2(CUE domain-containing2)是一種含有CUE結(jié)構(gòu)域的多功能蛋白質(zhì),廣泛在人類組織和器官中表達(dá)。大量研究表明,CUEDC2可以作用于多

3、種細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,參與許多細(xì)胞活動,如細(xì)胞周期的調(diào)節(jié),生長信號因子的轉(zhuǎn)導(dǎo)、腫瘤的發(fā)生發(fā)展及炎癥反應(yīng)。目前研究發(fā)現(xiàn)CUEDC2不僅與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),如乳腺癌、結(jié)腸炎相關(guān)性腫瘤、肺癌等,還可以參與炎癥反應(yīng),如結(jié)腸炎等。關(guān)于CUEDC2與急性胰腺炎的炎癥反應(yīng)中的關(guān)系尚未有研究報道。本研究擬初步探討CUEDC2在急性胰腺炎中的作用。
  目的:本研究通過雨蛙素誘導(dǎo)AR42J細(xì)胞建立急性胰腺炎細(xì)胞模型,并利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)過表達(dá)C

4、UEDC2。監(jiān)測細(xì)胞培養(yǎng)液中淀粉酶(amylase,AMY)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的水平,初步探討CUEDC2對急性胰腺炎腺泡細(xì)胞TNF-α、IL-6的影響。
  方法:
  1.應(yīng)用雨蛙素誘導(dǎo)AR42J細(xì)胞建立急性胰腺炎細(xì)胞模型。
  2.獲得過表達(dá) CUEDC2的AR42J細(xì)胞:采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將CUE

5、DC2質(zhì)粒轉(zhuǎn)入AR42J細(xì)胞中,應(yīng)用熒光顯微鏡查看轉(zhuǎn)染效率。
  3.實(shí)驗分組:
  AR42J細(xì)胞分為4組:陰性質(zhì)粒對照組(Neg-Control組)、陰性質(zhì)粒雨蛙素組(Neg-CAE組)、CUEDC2質(zhì)粒對照組(CUEDC2-Control組)、CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組(CUEDC2-CAE組)。具體分組方法如下:
  陰性質(zhì)粒組:應(yīng)用陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染AR42J細(xì)胞。Neg-CAE組給予10-7 mol/L雨蛙素,Ne

6、g-Control組給予等體積完全培養(yǎng)基,再將兩組分為3個亞組:4h、8h、24h。
  CUEDC2質(zhì)粒組:應(yīng)用 CUEDC2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 AR42J細(xì)胞。CUEDC2-CAE組給予10-7 mol/L雨蛙素,CUEDC2-Control組給予等體積完全培養(yǎng)基,再將兩組分為3個亞組:4h、8h、24h。
  4.CUEDC2測定:PCR檢測CUEDC2 mRNA的表達(dá)。western-blot檢測CUEDC2蛋白的表達(dá)。

7、>  5.淀粉酶、TNF-α、IL-6測定:應(yīng)用淀粉酶試劑盒檢測細(xì)胞上清中淀粉酶(amylase,AMY)水平,應(yīng)用ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)方法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平。
  6.統(tǒng)計學(xué)方法:應(yīng)用SPSS21.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,P<0.05

8、認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義。
  結(jié)果:
  1.成功建立了急性胰腺炎細(xì)胞模型,雨蛙素組 AMY的水平隨時間延長而增高且均較對照組升高(P<0.05)。雨蛙素組中CUEDC2mRNA水平較對照組下降(P<0.05)。雨蛙素組中各個時間點(diǎn)的CUEDC2mRNA無明顯變化(P>0.05);
  2.應(yīng)用CUEDC2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,可見綠色熒光顆粒,細(xì)胞生長狀態(tài)良好,表明轉(zhuǎn)染條件穩(wěn)定,細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功,轉(zhuǎn)染率約為65%-70%。CUED

9、C2質(zhì)粒組CUEDC2蛋白水平較對照組升高(P<0.05)。陰性質(zhì)粒組與對照組相比未見明顯差異(P>0.05);
  3.細(xì)胞培養(yǎng)上清 AMY:各個時間點(diǎn)比較,在陰性質(zhì)粒對照組和CUEDC2質(zhì)粒對照組中AMY水平未見明顯上升,且兩組之間未見明顯差異(P>0.05);在各個時間點(diǎn)AMY水平,陰性質(zhì)粒對照組和CUEDC2質(zhì)粒對照之間無顯著差異(P>0.05)。在陰性質(zhì)粒雨蛙素組和CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組中AMY水平隨時間逐漸增高(P<

10、0.05)。陰性質(zhì)粒雨蛙素組與 CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組均較各自對照組升高(P<0.05);CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組與陰性質(zhì)粒雨蛙素組相比 AMY水平下降(P<0.05);
  4.細(xì)胞培養(yǎng)上清TNF-α、IL-6:在陰性質(zhì)粒對照組和CUEDC2質(zhì)粒對照組中各個時間點(diǎn)TNF-α、IL-6水平較低,且兩組之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);在陰性質(zhì)粒雨蛙素組和 CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組中隨時間的延長 TNF-α、IL-6水平逐漸升高(

11、P<0.05)。陰性質(zhì)粒雨蛙素組與CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組在各個時間點(diǎn)TNF-α、IL-6水平均較各自對照組顯著上升(P<0.05);CUEDC質(zhì)粒雨蛙素組與陰性質(zhì)粒雨蛙素組相比,在各個時間點(diǎn)TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.應(yīng)用雨蛙素誘導(dǎo)可成功制備AP細(xì)胞模型。
  2.在AP細(xì)胞模型中CUEDC2 mRNA的水平下調(diào)。
  3.成功構(gòu)建了過表達(dá) CUEDC2蛋白的AP細(xì)胞模

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