CUEDC2對急性胰腺炎腺泡細(xì)胞TNF-α、IL-6的影響.pdf

1、急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）是臨床常見急腹癥，具有起病急、病情重、變化快等特點，除了胰腺本身病變之外，還可能引起胰腺外器官和組織的損傷，甚至最終誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS）、多器官功能障礙綜合征（multiple-organ dysfunction syndrome,MODS）等而導(dǎo)致死亡。盡管在過去的幾十年里急性胰腺炎的研

2、究取得明顯進(jìn)展，但是其發(fā)病機制仍較復(fù)雜。急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）無論病因如何，損傷的胰腺會引起胰酶的自身消化，同時作為炎癥刺激物刺激單核巨噬細(xì)胞及胰腺腺泡細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子，觸發(fā)炎癥介質(zhì)形成瀑布樣級聯(lián)反應(yīng)，最終會導(dǎo)致局部或全身炎癥反應(yīng)。CUEDC2（CUE domain-containing2）是一種含有CUE結(jié)構(gòu)域的多功能蛋白質(zhì)，廣泛在人類組織和器官中表達(dá)。大量研究表明，CUEDC2可以作用于多

3、種細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，參與許多細(xì)胞活動，如細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)，生長信號因子的轉(zhuǎn)導(dǎo)、腫瘤的發(fā)生發(fā)展及炎癥反應(yīng)。目前研究發(fā)現(xiàn)CUEDC2不僅與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，如乳腺癌、結(jié)腸炎相關(guān)性腫瘤、肺癌等，還可以參與炎癥反應(yīng)，如結(jié)腸炎等。關(guān)于CUEDC2與急性胰腺炎的炎癥反應(yīng)中的關(guān)系尚未有研究報道。本研究擬初步探討CUEDC2在急性胰腺炎中的作用。
　　目的：本研究通過雨蛙素誘導(dǎo)AR42J細(xì)胞建立急性胰腺炎細(xì)胞模型，并利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)過表達(dá)C

4、UEDC2。監(jiān)測細(xì)胞培養(yǎng)液中淀粉酶（amylase，AMY）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6,IL-6）的水平，初步探討CUEDC2對急性胰腺炎腺泡細(xì)胞TNF-α、IL-6的影響。
　　方法：
　　1.應(yīng)用雨蛙素誘導(dǎo)AR42J細(xì)胞建立急性胰腺炎細(xì)胞模型。
　　2.獲得過表達(dá) CUEDC2的AR42J細(xì)胞：采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將CUE

5、DC2質(zhì)粒轉(zhuǎn)入AR42J細(xì)胞中，應(yīng)用熒光顯微鏡查看轉(zhuǎn)染效率。
　　3.實驗分組：
　　AR42J細(xì)胞分為4組：陰性質(zhì)粒對照組（Neg-Control組）、陰性質(zhì)粒雨蛙素組（Neg-CAE組）、CUEDC2質(zhì)粒對照組（CUEDC2-Control組）、CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組（CUEDC2-CAE組）。具體分組方法如下：
　　陰性質(zhì)粒組:應(yīng)用陰性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染AR42J細(xì)胞。Neg-CAE組給予10-7 mol/L雨蛙素，Ne

6、g-Control組給予等體積完全培養(yǎng)基，再將兩組分為3個亞組:4h、8h、24h。
　　CUEDC2質(zhì)粒組:應(yīng)用 CUEDC2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 AR42J細(xì)胞。CUEDC2-CAE組給予10-7 mol/L雨蛙素，CUEDC2-Control組給予等體積完全培養(yǎng)基，再將兩組分為3個亞組:4h、8h、24h。
　　4.CUEDC2測定：PCR檢測CUEDC2 mRNA的表達(dá)。western-blot檢測CUEDC2蛋白的表達(dá)。

7、>　　5.淀粉酶、TNF-α、IL-6測定：應(yīng)用淀粉酶試劑盒檢測細(xì)胞上清中淀粉酶（amylase，AMY）水平，應(yīng)用ELISA（enzyme linked immunosorbent assay）方法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）及白細(xì)胞介素-6（interleukin-6,IL-6）水平。
　　6.統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS21.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，P<0.05

8、認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.成功建立了急性胰腺炎細(xì)胞模型，雨蛙素組 AMY的水平隨時間延長而增高且均較對照組升高（P＜0.05）。雨蛙素組中CUEDC2mRNA水平較對照組下降（P＜0.05）。雨蛙素組中各個時間點的CUEDC2mRNA無明顯變化（P＞0.05）；
　　2.應(yīng)用CUEDC2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，可見綠色熒光顆粒，細(xì)胞生長狀態(tài)良好，表明轉(zhuǎn)染條件穩(wěn)定，細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功，轉(zhuǎn)染率約為65％-70%。CUED

9、C2質(zhì)粒組CUEDC2蛋白水平較對照組升高（P＜0.05）。陰性質(zhì)粒組與對照組相比未見明顯差異（P＞0.05）；
　　3.細(xì)胞培養(yǎng)上清 AMY：各個時間點比較，在陰性質(zhì)粒對照組和CUEDC2質(zhì)粒對照組中AMY水平未見明顯上升，且兩組之間未見明顯差異（P＞0.05）；在各個時間點AMY水平，陰性質(zhì)粒對照組和CUEDC2質(zhì)粒對照之間無顯著差異（P＞0.05）。在陰性質(zhì)粒雨蛙素組和CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組中AMY水平隨時間逐漸增高（P＜

10、0.05）。陰性質(zhì)粒雨蛙素組與 CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組均較各自對照組升高（P＜0.05）；CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組與陰性質(zhì)粒雨蛙素組相比 AMY水平下降（P＜0.05）；
　　4.細(xì)胞培養(yǎng)上清TNF-α、IL-6：在陰性質(zhì)粒對照組和CUEDC2質(zhì)粒對照組中各個時間點TNF-α、IL-6水平較低，且兩組之間無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；在陰性質(zhì)粒雨蛙素組和 CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組中隨時間的延長 TNF-α、IL-6水平逐漸升高（

11、P＜0.05）。陰性質(zhì)粒雨蛙素組與CUEDC2質(zhì)粒雨蛙素組在各個時間點TNF-α、IL-6水平均較各自對照組顯著上升（P＜0.05）；CUEDC質(zhì)粒雨蛙素組與陰性質(zhì)粒雨蛙素組相比，在各個時間點TNF-α、IL-6水平均降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.應(yīng)用雨蛙素誘導(dǎo)可成功制備AP細(xì)胞模型。
　　2.在AP細(xì)胞模型中CUEDC2 mRNA的水平下調(diào)。
　　3.成功構(gòu)建了過表達(dá) CUEDC2蛋白的AP細(xì)胞模