SB203580對重癥急性胰腺炎大鼠TNF-α表達及胰腺腺泡細胞凋亡的影響.pdf

1、背景與目的：急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是胰腺的急性炎癥的過程,波及胰周組織甚至遠離胰腺的系統(tǒng)器官,其嚴(yán)重程度從僅有胰腺輕度水腫到多器官功能衰竭和死亡。急性胰腺炎的主要病理生理過程是相關(guān)的胰腺組織炎癥、水腫、壞死以及胰腺外器官炎癥和損傷,在急性胰腺炎患者中總的死亡率接近5％。輕癥急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)和重癥急性胰腺炎(severe acutepancreatiti

2、s,SAP)兩者發(fā)生率比約為80％:20％,在多數(shù)患者中,胰腺炎所致的胰腺腺泡細胞損傷和局部炎癥會自行消退,但在某些情況下疾病逐漸進展為全身性疾病。在重癥急性壞死性胰腺炎中往往出現(xiàn)難以控制的全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)并誘發(fā)多器官功能衰竭(multiple organ failure,MOF)。
　　 普遍認為,胰腺炎的嚴(yán)重程度取決于胰腺腺泡細胞損

3、傷程度。炎癥反應(yīng)開始早期,由胰腺腺泡細胞產(chǎn)生的細胞因子及炎癥趨化因子成為始動因素,導(dǎo)致中性粒細胞和巨噬細胞等炎性細胞浸潤,而中性粒細胞聚集已被證實是導(dǎo)致局部變化及全身嚴(yán)重反應(yīng)的重要因素。炎性細胞募集和各種炎癥細胞活化會導(dǎo)致進一步的腺泡細胞損傷并釋放大量的腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素(IL)-1、白細胞介素IL-2、白細胞介素IL-6等細胞因子和其他趨化因子,這些炎癥介質(zhì)在細胞的損傷中發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用。
　　 細胞

4、內(nèi)信號傳導(dǎo)通路介導(dǎo)的胰腺炎癥反應(yīng)機制也已確定,這些信號系統(tǒng)包括絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinaSe,MAPK)信號傳導(dǎo)通路、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)和磷脂酰肌醇3激酶(phospholipids Inositol3 kinase,PI-3K)。p38MAPK在實驗性胰腺炎中被活化,并在胰

5、腺炎的發(fā)病機制中扮演重要角色,抑制這些信號已被證明在減輕炎癥和改善胰腺炎的嚴(yán)重程度上有顯著作用。
　　 胰腺腺泡細胞產(chǎn)生的細胞因子可能介導(dǎo)細胞死亡。小鼠胰腺腺泡細胞表達了細胞因子及炎癥因子TNF-α,IL-6,KC,MCP-1,MIP-2,NF-κB,AP-1。研究表明,p38MAPK存在于胰腺細胞激活的早期,在炎癥細胞浸潤到組織內(nèi)時就活化。各種不同刺激均可以激活p38MAPK,p38MAPK介導(dǎo)了細胞內(nèi)TNF-α,IL-1β,

6、IL-6,IL-8的產(chǎn)生和表達,這種調(diào)控機制的論點剛剛開始提出。胰腺腺泡細胞是細胞因子表達的源頭,通過RT-PCR,Western blot,免疫細胞化學(xué)等方法顯示有大量的單核細胞趨化蛋白-1和IL、TNF-α等其它大量的細胞因子產(chǎn)生。細胞因子的表達可以被p38MAPK的抑制劑或部分被NF-κB抑制劑所抑制。p38MAPK抑制劑如SB203580可抑制細胞因子mRNA表達。
　　 TNF-α是一個多效性細胞因子,其活化可誘導(dǎo)基因

7、表達,細胞生長及細胞死亡。TNF-α產(chǎn)生這些效應(yīng)的生物學(xué)機制仍不明確。p38MAPK活化與TNF-α介導(dǎo)的細胞因子表達之間存在相關(guān)性。細胞凋亡是由基因控制的細胞自動的程序性死亡,調(diào)控機制復(fù)雜,凋亡不引起炎性刺激,與細胞壞死在許多方面有著顯著的差別和不同。在實驗?zāi)Ｐ图芭R床急性胰腺炎中均發(fā)現(xiàn)有胰腺腺泡細胞的凋亡存在,研究表明急性胰腺炎中胰腺腺泡細胞的凋亡可能是對機體有利的保護性反應(yīng).并可能與急性胰腺炎病情嚴(yán)重程度呈負相關(guān)。重癥急性胰腺炎時,

8、尤其是SAP早期即產(chǎn)生了大量的TNF-α,在動物實驗和臨床都已證實TNF-α明顯增高會誘發(fā)內(nèi)毒素血癥、引發(fā)多器官功能障礙綜合征,但此時TNF-α并沒有對胰腺起到保護作用,合理的解釋是:SAP發(fā)生后,機體發(fā)生了劇烈地炎癥反應(yīng),誘導(dǎo)細胞凋亡過程復(fù)雜,急性胰腺炎時TNF-α對凋亡的影響及機制仍不明確,過量的TNF-α對機體的損害可能大于保護作用。
　　 重癥急性胰腺炎是一種泛發(fā)的嚴(yán)重腹腔內(nèi)病變,截至目前,沒有的特異性方法能夠確切地降低

9、其發(fā)病率及死亡率,SAP的治療仍然和以前一樣主要采用對癥支持,盡管日趨完善,但仍未能下調(diào)嚴(yán)重的全身性炎癥。從上游直接抑制胰腺腺泡細胞內(nèi)的初始信號,從而抑制其引發(fā)的細胞因子和趨化因子的釋放,減輕胰腺腺泡細胞的損傷,有關(guān)這方面的研究不多。我們試驗的目的在于通過對上游調(diào)控因子的抑制來觀察是否能更根本抑制炎癥的產(chǎn)生,并探討p38MAPK抑制劑SB203580對TNF-α的表達及對胰腺腺泡細胞凋亡的影響。
　　 方法:Wistar大鼠63

10、只,隨機分為三組:假手術(shù)對照組(S組),重癥急性胰腺炎組(P組),SB203580治療組(T組),每組21只。SAP模型由5％?；悄懰徕c大鼠膽胰管逆行注射誘發(fā)而成。模型成功后,胰腺炎組(P組)不做處理:治療組(T組)立即行SB203580腹腔注射10mg/kg;對照組(S組)僅開腹,不做其他處理;術(shù)后各組于1、2、4h三個時間點處死大鼠,各時間點Elisa法測血清TNF-α水平,并取胰腺組織行病理檢查,免疫組化法檢測p-p38MAPK表

11、達,TUNEL法檢測胰腺腺泡細胞凋亡。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件,統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示,計量資料滿足正態(tài)性,方差齊性采用單因素方差分析(one-wayANOVA),多組均數(shù)間的兩兩比較采用LSD-t方法;P＜0.05具顯著性。
　　 結(jié)果:血清TNF-α水平隨SAP病情的進展而升高(P＜0.05),其水平胰腺炎組及治療組各時間點均較對照組高,但TNF-α水平治療組各時間點顯著低于胰腺炎組(P＜0.05);p

12、38MAPK活化程度1、2、4h三個時間點胰腺炎組及治療組均較對照組升高(P＜0.05),但治療組活性顯著低于胰腺炎組(P＜0.05);TUNEL顯示對照組胰腺組織存在極少量的凋亡細胞,治療組、胰腺炎組細胞凋亡率均高于對照組,治療組凋亡率高于胰腺炎組(P＜0.05);胰腺病理損害光鏡下治療組明顯輕于胰腺炎組。
　　 結(jié)論:
　　 1.重癥急性胰腺炎的發(fā)病早期p38MAPK活化,說明其參與了重癥急性胰腺炎的發(fā)病起始過程。<