SB203580對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠TNF-α表達(dá)及胰腺腺泡細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、背景與目的：急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是胰腺的急性炎癥的過(guò)程,波及胰周組織甚至遠(yuǎn)離胰腺的系統(tǒng)器官,其嚴(yán)重程度從僅有胰腺輕度水腫到多器官功能衰竭和死亡。急性胰腺炎的主要病理生理過(guò)程是相關(guān)的胰腺組織炎癥、水腫、壞死以及胰腺外器官炎癥和損傷,在急性胰腺炎患者中總的死亡率接近5％。輕癥急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)和重癥急性胰腺炎(severe acutepancreatiti

2、s,SAP)兩者發(fā)生率比約為80％:20％,在多數(shù)患者中,胰腺炎所致的胰腺腺泡細(xì)胞損傷和局部炎癥會(huì)自行消退,但在某些情況下疾病逐漸進(jìn)展為全身性疾病。在重癥急性壞死性胰腺炎中往往出現(xiàn)難以控制的全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)并誘發(fā)多器官功能衰竭(multiple organ failure,MOF)。
　　 普遍認(rèn)為,胰腺炎的嚴(yán)重程度取決于胰腺腺泡細(xì)胞損

3、傷程度。炎癥反應(yīng)開始早期,由胰腺腺泡細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子及炎癥趨化因子成為始動(dòng)因素,導(dǎo)致中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn),而中性粒細(xì)胞聚集已被證實(shí)是導(dǎo)致局部變化及全身嚴(yán)重反應(yīng)的重要因素。炎性細(xì)胞募集和各種炎癥細(xì)胞活化會(huì)導(dǎo)致進(jìn)一步的腺泡細(xì)胞損傷并釋放大量的腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素(IL)-1、白細(xì)胞介素IL-2、白細(xì)胞介素IL-6等細(xì)胞因子和其他趨化因子,這些炎癥介質(zhì)在細(xì)胞的損傷中發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用。
　　 細(xì)胞

4、內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路介導(dǎo)的胰腺炎癥反應(yīng)機(jī)制也已確定,這些信號(hào)系統(tǒng)包括絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinaSe,MAPK)信號(hào)傳導(dǎo)通路、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)和磷脂酰肌醇3激酶(phospholipids Inositol3 kinase,PI-3K)。p38MAPK在實(shí)驗(yàn)性胰腺炎中被活化,并在胰

5、腺炎的發(fā)病機(jī)制中扮演重要角色,抑制這些信號(hào)已被證明在減輕炎癥和改善胰腺炎的嚴(yán)重程度上有顯著作用。
　　 胰腺腺泡細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子可能介導(dǎo)細(xì)胞死亡。小鼠胰腺腺泡細(xì)胞表達(dá)了細(xì)胞因子及炎癥因子TNF-α,IL-6,KC,MCP-1,MIP-2,NF-κB,AP-1。研究表明,p38MAPK存在于胰腺細(xì)胞激活的早期,在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)到組織內(nèi)時(shí)就活化。各種不同刺激均可以激活p38MAPK,p38MAPK介導(dǎo)了細(xì)胞內(nèi)TNF-α,IL-1β,

6、IL-6,IL-8的產(chǎn)生和表達(dá),這種調(diào)控機(jī)制的論點(diǎn)剛剛開始提出。胰腺腺泡細(xì)胞是細(xì)胞因子表達(dá)的源頭,通過(guò)RT-PCR,Western blot,免疫細(xì)胞化學(xué)等方法顯示有大量的單核細(xì)胞趨化蛋白-1和IL、TNF-α等其它大量的細(xì)胞因子產(chǎn)生。細(xì)胞因子的表達(dá)可以被p38MAPK的抑制劑或部分被NF-κB抑制劑所抑制。p38MAPK抑制劑如SB203580可抑制細(xì)胞因子mRNA表達(dá)。
　　 TNF-α是一個(gè)多效性細(xì)胞因子,其活化可誘導(dǎo)基因

7、表達(dá),細(xì)胞生長(zhǎng)及細(xì)胞死亡。TNF-α產(chǎn)生這些效應(yīng)的生物學(xué)機(jī)制仍不明確。p38MAPK活化與TNF-α介導(dǎo)的細(xì)胞因子表達(dá)之間存在相關(guān)性。細(xì)胞凋亡是由基因控制的細(xì)胞自動(dòng)的程序性死亡,調(diào)控機(jī)制復(fù)雜,凋亡不引起炎性刺激,與細(xì)胞壞死在許多方面有著顯著的差別和不同。在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ图芭R床急性胰腺炎中均發(fā)現(xiàn)有胰腺腺泡細(xì)胞的凋亡存在,研究表明急性胰腺炎中胰腺腺泡細(xì)胞的凋亡可能是對(duì)機(jī)體有利的保護(hù)性反應(yīng).并可能與急性胰腺炎病情嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)。重癥急性胰腺炎時(shí),

8、尤其是SAP早期即產(chǎn)生了大量的TNF-α,在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床都已證實(shí)TNF-α明顯增高會(huì)誘發(fā)內(nèi)毒素血癥、引發(fā)多器官功能障礙綜合征,但此時(shí)TNF-α并沒(méi)有對(duì)胰腺起到保護(hù)作用,合理的解釋是:SAP發(fā)生后,機(jī)體發(fā)生了劇烈地炎癥反應(yīng),誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過(guò)程復(fù)雜,急性胰腺炎時(shí)TNF-α對(duì)凋亡的影響及機(jī)制仍不明確,過(guò)量的TNF-α對(duì)機(jī)體的損害可能大于保護(hù)作用。
　　 重癥急性胰腺炎是一種泛發(fā)的嚴(yán)重腹腔內(nèi)病變,截至目前,沒(méi)有的特異性方法能夠確切地降低

9、其發(fā)病率及死亡率,SAP的治療仍然和以前一樣主要采用對(duì)癥支持,盡管日趨完善,但仍未能下調(diào)嚴(yán)重的全身性炎癥。從上游直接抑制胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)的初始信號(hào),從而抑制其引發(fā)的細(xì)胞因子和趨化因子的釋放,減輕胰腺腺泡細(xì)胞的損傷,有關(guān)這方面的研究不多。我們?cè)囼?yàn)的目的在于通過(guò)對(duì)上游調(diào)控因子的抑制來(lái)觀察是否能更根本抑制炎癥的產(chǎn)生,并探討p38MAPK抑制劑SB203580對(duì)TNF-α的表達(dá)及對(duì)胰腺腺泡細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法:Wistar大鼠63

10、只,隨機(jī)分為三組:假手術(shù)對(duì)照組(S組),重癥急性胰腺炎組(P組),SB203580治療組(T組),每組21只。SAP模型由5％?；悄懰徕c大鼠膽胰管逆行注射誘發(fā)而成。模型成功后,胰腺炎組(P組)不做處理:治療組(T組)立即行SB203580腹腔注射10mg/kg;對(duì)照組(S組)僅開腹,不做其他處理;術(shù)后各組于1、2、4h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠,各時(shí)間點(diǎn)Elisa法測(cè)血清TNF-α水平,并取胰腺組織行病理檢查,免疫組化法檢測(cè)p-p38MAPK表

11、達(dá),TUNEL法檢測(cè)胰腺腺泡細(xì)胞凋亡。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示,計(jì)量資料滿足正態(tài)性,方差齊性采用單因素方差分析(one-wayANOVA),多組均數(shù)間的兩兩比較采用LSD-t方法;P＜0.05具顯著性。
　　 結(jié)果:血清TNF-α水平隨SAP病情的進(jìn)展而升高(P＜0.05),其水平胰腺炎組及治療組各時(shí)間點(diǎn)均較對(duì)照組高,但TNF-α水平治療組各時(shí)間點(diǎn)顯著低于胰腺炎組(P＜0.05);p

12、38MAPK活化程度1、2、4h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)胰腺炎組及治療組均較對(duì)照組升高(P＜0.05),但治療組活性顯著低于胰腺炎組(P＜0.05);TUNEL顯示對(duì)照組胰腺組織存在極少量的凋亡細(xì)胞,治療組、胰腺炎組細(xì)胞凋亡率均高于對(duì)照組,治療組凋亡率高于胰腺炎組(P＜0.05);胰腺病理?yè)p害光鏡下治療組明顯輕于胰腺炎組。
　　 結(jié)論:
　　 1.重癥急性胰腺炎的發(fā)病早期p38MAPK活化,說(shuō)明其參與了重癥急性胰腺炎的發(fā)病起始過(guò)程。<