復(fù)方蒿甲醚-本芴醇片處方工藝改進(jìn)及增加蒿甲醚和本芴醇溶解度的研究.pdf

1、瘧疾是由蚊蟲傳播的一種疾病，是嚴(yán)重危害人類健康的全球性傳染病之一，與艾滋病、結(jié)核病一起被世界衛(wèi)生組織列為全球急需控制的三大公共衛(wèi)生問題，廣泛流行于亞洲、非洲及拉丁美洲的107個(gè)國(guó)家或地區(qū)。
　　瘧疾的治療藥物有很多，但是有些由于使用時(shí)間過長(zhǎng)，不可避免的出現(xiàn)了一些抗藥性，在研制新型抗瘧藥物的同時(shí)，將原有的藥物組成復(fù)方制劑用于治療瘧疾不失為一種有效的手段，由蒿甲醚與本芴醇組成的復(fù)方制劑，為世界衛(wèi)生組織推薦的瘧疾治療藥物，在瘧疾的治療中

2、發(fā)揮了巨大作用。但蒿甲醚與本芴醇水溶性差、生物利用度低，因此有必要提高它們的水溶性以改善生物利用度，從而減少給藥量、降低毒副作用。本課題首先對(duì)復(fù)方蒿甲醚/本芴醇片劑目前企業(yè)存在的問題進(jìn)行研究;然后將蒿甲醚制備包合物，本芴醇制備納米脂質(zhì)載體，改善蒿甲醚和本芴醇溶解度，提高生物利用度的方法，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證溶解度的改善和生物利用度的提高，為復(fù)方蒿甲醚/本芴醇新劑型的開發(fā)提供依據(jù)。
　　1.復(fù)方蒿甲醚/本芴醇片的處方工藝改進(jìn)
　　

3、目前“復(fù)方蒿甲醚/本芴醇片”企業(yè)存在的主要問題是:可壓性差、黏沖、崩解時(shí)間長(zhǎng)，溶出度低。
　　對(duì)蒿甲醚和本芴醇分別制粒、分別壓片，確定粘沖的原因，以分散均勻性、脆碎度、粘沖情況為評(píng)價(jià)指標(biāo)，分別選用乳糖、甘露醇、MCC、乳糖與MCC的混合物作為填充劑，通過改變處方組成成分及比例調(diào)節(jié)可壓性差;采用薄膜液法、改變制粒工藝，解決片劑生產(chǎn)過程中存在的粘沖問題;在保證片子硬度和脆碎度合格的同時(shí)，減小片子壓力，分別選用L-HPC、CMS-Na、

4、PVPP作為崩解劑進(jìn)行篩選，調(diào)節(jié)使用崩解劑的種類、用量和加入方法等改善片劑崩解時(shí)間和溶出度。
　　結(jié)果表明，采用薄膜液法解決粘沖問題，該方法簡(jiǎn)單有效、便于大規(guī)模生產(chǎn)。以MCC作為填充劑效果最佳;分別選用不同濃度的HPMC E50溶液作為粘合劑進(jìn)行篩選，最終選擇3％的HPMC E50溶液作為粘合劑解決粘沖問題;選用L-HPC和PVPP作為崩解劑，分別內(nèi)加75％外加25％，壓片厚度選擇2.7mm，壓片速度選擇15rpm。三批重現(xiàn)性試驗(yàn)

5、所制備的片劑，外觀、含量、含量均勻度、脆碎度均符合要求。
　　以上通過處方工藝改進(jìn)，復(fù)方蒿甲醚和本芴醇片的溶出度較原工藝片有所提高，但蒿甲醚的溶出較慢，本芴醇的溶出介質(zhì)中加入了較多的表面活性劑才滿足溶出要求，與體內(nèi)環(huán)境差別較大，因此，尋找新的方法提高蒿甲醚和本芴醇的溶解度，提高其生物利用度非常重要。
　　2.蒿甲醚-2-HP-β-CD包合物研究
　　針對(duì)蒿甲醚的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，選擇2-HP-β-CD為載體制備包合物增加

6、其溶解度。
　　(1)將蒿甲醚與1mol/1鹽酸進(jìn)行衍生化反應(yīng)，采用UV法測(cè)定蒿甲醚包合物的含量并進(jìn)行了方法學(xué)考察;
　　(2)采用溶液攪拌法制備蒿甲醚包合物，分別對(duì)投料比、攪拌時(shí)間、攪拌溫度進(jìn)行了考察，以載藥量和包合率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)處方工藝因素進(jìn)行優(yōu)化，通過重現(xiàn)性試驗(yàn)確定了處方工藝的穩(wěn)定性;
　　(3)分別用紅外光譜法、差示掃描量熱法、溶解度實(shí)驗(yàn)和熔點(diǎn)測(cè)定法對(duì)所制備的包合物進(jìn)行了驗(yàn)證，并對(duì)包合物的穩(wěn)定性進(jìn)行了初步考察

7、;
　　(4)建立了高效液相法測(cè)定血漿樣品中蒿甲醚濃度的方法并進(jìn)行了方法學(xué)考察，以火鼠為研究對(duì)象，分別灌胃給予蒿甲醚原料藥和包合物，分別于給藥后0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8h于大鼠頸靜脈竇取血，將樣品處理后進(jìn)行血藥濃度的測(cè)定，繪制蒿甲醚的血漿藥物濃度隨時(shí)間變化的曲線，用DAS2.0軟件求算相關(guān)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，對(duì)原料藥和包合物的體內(nèi)釋藥進(jìn)行分析比較。
　　結(jié)果表明:
　　(1)蒿甲醚衍生物在1 mm

8、ol/1鹽酸溶液中，線性關(guān)系良好，精密度、回收率高，輔料不干擾主藥測(cè)定，采用UV法測(cè)定蒿甲醚包合物的含量方法可行。分別用研磨法、溶液攪拌法和超聲法制備了蒿甲醚包合物，結(jié)果選擇溶液攪拌法，投料比為1:36、攪拌溫度50℃、攪拌時(shí)間1h，三批重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)制備的包合物載藥量和包合率分別為2.63％±0.01％和97.53％±0.36％，說明該法制各蒿甲醚包合物處方工藝穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。
　　(2)紅外光譜法驗(yàn)證結(jié)果表明包合物的紅外圖譜和2-

9、HP-β-CD的基本一致，與蒿甲醚和2-HP-β-CD物理混合物的圖譜略有不同;差示掃描量熱法驗(yàn)證結(jié)果表明，與物理混合物比較，包合物中藥物的吸熱峰和放熱峰均消失;溶解度實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果顯示蒿甲醚包合物的溶解度為11.28±2.24mg/ml，較原料藥在水中的溶解度1.18μg/ml有顯著提高;采用毛細(xì)管法測(cè)定蒿甲醚包合物的熔點(diǎn)，結(jié)果為226-229℃，查閱文獻(xiàn)可知，蒿甲醚的熔點(diǎn)為86-89℃，2-HP-β-CD的熔點(diǎn)為278℃，蒿甲醚包合物

10、的熔點(diǎn)與原料藥和載體材料明顯不同。以上四種驗(yàn)證方法均說明包合物已形成。
　　(3)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果表明，在高溫和光照條件下，包合物中的藥物含量下降較少，高濕條件下藥物含量下降較大，具有較強(qiáng)的引濕性，因此，該制劑儲(chǔ)存時(shí)，應(yīng)密閉防潮保存。
　　(4)采用高效液相法測(cè)定血漿樣品中蒿甲醚濃度，專屬性強(qiáng)、線性關(guān)系良好、精密度高、回收率和穩(wěn)定性符合測(cè)定要求，內(nèi)源性成分不干擾主藥測(cè)定，符合生物測(cè)定要求。藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，原料藥組和

11、包合物組的消除半衰期(t1/2)分別為2.73h和1.80h;平均滯留時(shí)問(MRT0-∞)分別為3.94h和3.72h;達(dá)峰時(shí)(tmax)分別為3h和2h;峰濃度(Cmax)分別為4.19μg/ml和8.86μg/ml;血藥濃度-時(shí)問曲線下面積(AUC0-∞)分別為25.55μg/ml·h和36.88μg/ml·h，血漿中的AUC0-∞包合物組是原料藥組的1.44倍，蒿甲醚制備成包合物后，吸收更快，起效更為迅速，生物利用度明顯提高。

12、r>　　3.本芴醇NLC的研究
　　針對(duì)本芴醇的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，選擇納米脂質(zhì)載體(NLC)增加其溶解度。
　　(1)采用UV法測(cè)定本芴醇NLC的含量并進(jìn)行了方法學(xué)考察;
　　(2)采用超聲分散法制備本芴醇NLC，以粒徑、包封率、載藥量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行了處方工藝的篩選，考察了藥脂比、液固脂質(zhì)比、相體積比等處方因素以及滴加速度、乳化時(shí)間、攪拌時(shí)間等工藝因素，通過重現(xiàn)性試驗(yàn)驗(yàn)證處方工藝的穩(wěn)定性，并對(duì)本芴醇NLC理化性質(zhì)進(jìn)行了

13、研究;
　　(3)采用冷凍干燥技術(shù)制備本芴醇NLC粉針劑，篩選了凍干保護(hù)劑甘露醇的用量，以粒徑、包封率為評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)三批重現(xiàn)性試驗(yàn)制各的本芴醇NLC進(jìn)行評(píng)價(jià);
　　(4)對(duì)本芴醇NLC凍干制劑的穩(wěn)定性進(jìn)行了初步考察;
　　(5)建立了高效液相法測(cè)定血漿樣品中本芴醇濃度的方法并進(jìn)行了方法學(xué)考察，以大鼠為研究對(duì)象，分別灌胃本芴醇原料藥和本芴醇NLC，分別于給藥后0.5、2.0、5.0、8.0、24.0、30.0、48.0、5

14、4.0、72.0、120.0h于大鼠頸靜脈竇取血，將樣品處理后進(jìn)行血藥濃度的測(cè)定，繪制本芴醇的血漿藥物濃度隨時(shí)間變化的曲線，用DAS2.0軟件求算相關(guān)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，對(duì)原料藥和NLC的體內(nèi)釋藥進(jìn)行分析比較。
　　結(jié)果表明:
　　(1)本芴醇在乙醇溶液中，線性關(guān)系良好，精密度、回收率高，輔料不干擾主藥測(cè)定，采用UV法測(cè)定本芴醇NLC的含量方法可行。
　　(2)分別用熔融乳化-低溫固化法、超聲分散法、高壓勻質(zhì)法制備本芴醇N

15、LC，結(jié)果選擇超聲分散法，確定的最優(yōu)處方為:藥脂比1∶8、液固脂質(zhì)比為1∶3、泊洛沙姆188的濃度為0.50％、相體積比1∶4;最佳制備工藝為:滴加速度12ml/h、乳化時(shí)間40min、攪拌速度1000rpm、超聲時(shí)間15min。按最優(yōu)處方工藝制備三批本芴醇NLC，電鏡圖片顯示其為類球形、大小均一，粒徑為213.30±8.54nm，分布較為均勻，pH為6.43±0.19，包封率為94.90±0.51％、載藥量為9.05±0.19％，表明

16、處方工藝穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。
　　(3)進(jìn)行了本芴醇NLC凍干制劑的研究，篩選了凍干保護(hù)劑甘露醇的用量，以粒徑、包封率為指標(biāo)對(duì)三批重現(xiàn)性試驗(yàn)制備的本芴醇NLC進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果為，粒徑295.7±11.9nm，包封率93.70±1.52％，說明處方工藝穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。
　　(4)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果表明，在高溫和光照條件下，本芴醇NLC中的藥物含量下降程較少，高濕條件下藥物含量下降較大，具有較強(qiáng)的引濕性，因此，該制劑儲(chǔ)存時(shí)，應(yīng)密閉防潮

17、保存。
　　(5)采用高效液相法測(cè)定血漿樣品中本芴醇濃度，專屬性強(qiáng)、線性關(guān)系良好、精密度高、回收率和穩(wěn)定性符合測(cè)定要求，內(nèi)源性成分不干擾主藥測(cè)定，符合生物測(cè)定要求。藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，原料藥組和NLC組的消除半衰期(t1/2)分別為23.09h和42.89h;平均滯留時(shí)間（MRT0-∞）分別為43.81h和42.00h;達(dá)峰時(shí)(tmax)分別為8h和2h;峰濃度(Cmax)分別為2.57μg/ml和4.81μg/ml;血藥濃度

18、-時(shí)間曲線下面積(AUC0-∞)分別為111.07μg/ml·h和182.93μg/ml·h，血漿中的AUC0-∞包合物組是原料藥組的1.65倍，蒿甲醚制備成NLC后，吸收更快，起效更為迅速，生物利用度明顯提高。
　　4.結(jié)論
　　薄膜液法解決片劑工業(yè)生產(chǎn)中的粘沖問題是一種有效的、便于大規(guī)模生產(chǎn)的方法;溶液攪拌法制備的蒿甲醚包合物溶解性較原料藥顯著提高，生物利用度也有較大改善，該方法對(duì)解決難溶性藥物的溶解度，對(duì)包合物的工業(yè)生