6-姜酚對(duì)阿爾茨海默病的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:阿爾茨海默病(AD)是一種常見的發(fā)生于老年及老年前期的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙、記憶損害、個(gè)性改變以及精神行為異常為主要表現(xiàn)，WHO已將AD列為21世紀(jì)五大重點(diǎn)疾病之一。目前，用于治療AD的藥物只能在一定程度上改善AD的臨床癥狀，而有效防止AD發(fā)生或者治愈AD的藥物尚未出現(xiàn)。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，生姜提取物對(duì)β淀粉樣蛋白(Aβ)誘導(dǎo)的AD模型鼠的行為功能障礙具有保護(hù)作用。而6-姜酚是從生姜中提取的酚類物質(zhì)，是生姜提取

2、物中的重要活性成分。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外孵育的方法觀察6-姜酚對(duì)Aβ1-42聚集的影響，探討6-姜酚對(duì)Aβ1-42所致的大鼠PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制。
　　方法:(1)Aβ1-42單獨(dú)或與不同濃度的6-姜酚于37℃培養(yǎng)箱中共同孵育5d后，采用硫磺素T(ThT)熒光檢測(cè)法分析6-姜酚對(duì)Aβ1-42聚集的影響;(2)未分化的PC12細(xì)胞經(jīng)神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)作用5d分化為類神經(jīng)元樣細(xì)胞后，通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度Aβ

3、1-42對(duì)PC12細(xì)胞作用24、48及72 h后的細(xì)胞存活率及觀察不同濃度6-姜酚對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用;(3)通過(guò)Hoechst33258核染色法檢測(cè)6-姜酚對(duì)Aβ1-42致PC12細(xì)胞凋亡的細(xì)胞核形態(tài)改變;(4)采用流式細(xì)胞凋亡術(shù)進(jìn)一步分析6-姜酚對(duì)Aβ1-42致PC12細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用;(5)采用DCFH-DA熒光探針法檢測(cè)6-姜酚對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)PC12細(xì)胞產(chǎn)生氧自由基(ROS)的影響;(6)根據(jù)測(cè)定試劑盒檢測(cè)

4、6-姜酚對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)PC12細(xì)胞產(chǎn)生乳酸脫氫酶(LDH)、抗氧化物歧化酶(SOD)、細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的影響;(7)采用Western Blot檢測(cè)6-姜酚對(duì)Aβ1-42誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞糖原合成激酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(Ser9)，Akt及磷酸化Akt(Ser473)表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:(1)6-姜酚與Aβ1-42共同孵育5d后的熒光強(qiáng)度均較Aβ1-42組顯著降低，提示6-姜酚

5、對(duì)Aβ1-42的聚集具有拮抗作用;(2)Aβ1-42作用于PC12細(xì)胞，細(xì)胞存活率與Aβ1-42的劑量及作用時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，其中10μM的Aβ1-42作用48 h對(duì)PC12細(xì)胞產(chǎn)生較為顯著的損傷作用，因而我們以此作為AD的細(xì)胞模型，用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究;(3)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，6-姜酚在80、120及200μM時(shí)均對(duì)Aβ1-42引起的細(xì)胞損傷具有顯著的保護(hù)作用，并且在劑量為120μM時(shí)具有最佳的作用效果;(4)Hoechst33258核染

6、色及流式細(xì)胞凋亡術(shù)實(shí)驗(yàn)均提示6-姜酚在80、120及200μM時(shí)對(duì)Aβ1-42引起的細(xì)胞損傷具有顯著的保護(hù)作用;(5)Aβ1-42顯著增加細(xì)胞內(nèi)ROS與MDA的含量及培養(yǎng)液中LDH的活性及NO的水平，而經(jīng)6-姜酚預(yù)處理4h后ROS、MDA與NO的含量及LDH的活性均較Aβ1-42處理組顯著降低;此外，6-姜酚處理組的SOD水平顯著高于Aβ1-42處理組的;(6)PC12細(xì)胞經(jīng)Aβ1-42作用48 h后，GSK-3β及Akt的磷酸化水平均