人參皂苷Rd對阿爾茨海默病模型的神經保護作用及機制探討.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimerdisease,AD)多在老年時期起病，起病隱秘，病程緩慢時間長且不可逆，是一組目前病因并不明確的腦部原發(fā)性退行性變性疾病。臨床上以學習記憶認知能力進行性衰退為主，常伴有一定程度的語言、精神和人格等方面的異常。而其基本病理特點表現為Aβ沉積形成的老年斑、磷酸化Tau蛋白沉積形成的神經纖維纏結以及大量膽堿能神經元的丟失等。由于AD病人發(fā)病影響因素較多，病因病理機制非常復雜，故目前治療并無明顯突破，缺乏有效安

2、全的治療藥物與手段。
　　課題組人員前期已經發(fā)現人參皂苷Rd能夠抑制AD模型鼠海馬內炎癥反應的發(fā)生，抑制培養(yǎng)的海馬神經元氧化應激損傷而保護神經元。故本課題以此為研究基礎，從體內、體外、純體外三方面觀察Rd對實驗性AD模型的神經保護作用并對其機制作初步探討，為開發(fā)安全有效的防治AD新藥提供基礎研究依據。
　　研究目的：探討人參皂苷Rd對實驗性AD模型的學習記憶、病理特征的影響及對其保護機制的初步探討，為尋找防治AD藥物以及研究

3、Rd作用靶點提供一定的實驗基礎。
　　研究方法：（1）研究對象：急性腦損傷模型：成年清潔級SD大鼠雙側海馬CA1區(qū)立體定向微量注射Aβ1-40；慢性AD動物模型：APP轉基因小鼠；體外細胞模型：Aβ25-35干預的皮層神經元。（2）對急性腦損傷模型大鼠和APP轉基因小鼠進行Morris水迷宮檢測觀察Rd對AD模型動物的學習記憶行為能力的影響，Nissl染色觀察其組織形態(tài)學變化；對Aβ25-35干預的皮層神經元進行MTT染色觀察Rd

4、對其存活率的影響和進行免疫熒光染色觀察細胞形態(tài)學變化。（3）Westernblot方法檢測磷酸化Tau蛋白主要磷酸化位點的表達，觀察Rd對AD模型內病理特征的影響，同時對調控磷酸化Tau蛋白的關鍵激酶和磷酸酶的表達也進行了觀察。初步探討Rd對AD模型動物的保護作用機制。（4）體外純化學實驗進一步排除各種體內體外環(huán)境的影響，Westernblot方法檢測化學反應后磷酸化Tau蛋白主要磷酸化位點表達的變化，進一步探討Rd對AD模型動物的保護

5、的作用機制及其作用靶點。
　　實驗結果：（1）Rd（5，10，30mg/kg）對Aβ1-40急性腦損傷大鼠的學習記憶功能均有改善:能夠縮短海馬微量注射Aβ1-40大鼠水迷宮逃避潛伏期的時間、增加模型鼠穿越原平臺次數，減少模型鼠海馬CA1區(qū)神經元的丟失；Rd（10mg/kg）可明顯改善APP轉基因小鼠的學習記憶功能：縮短APP轉基因小鼠水迷宮逃避潛伏期的時間、增加模型鼠穿越原平臺次數；Rd（2.5，5μM）能提高體外培養(yǎng)皮層神經元的