雞血管內皮鋅指轉錄因子(Vezf1)在血管內皮細胞分化與血管生成中的作用研究.pdf

1、血管系統(tǒng)的形成始于胚胎中胚層形成過程中其部分細胞分化為血管內皮前體細胞。這些細胞經(jīng)過進一步增殖、分化，并通過移行、聚集、極化形成最初的血管網(wǎng)絡，該過程稱為血管發(fā)生(vasculogenesis)。伴隨胚胎的生長發(fā)育，這一初始血管網(wǎng)絡通過被統(tǒng)稱為新血管生成(angiogenesis)的過程而改建與生長，最終形成由多級血管組成的功能血管系統(tǒng)。與此同時，各級血管在血管壁細胞(周細胞、血管平滑肌細胞等)生成過程中成熟穩(wěn)定。因此，血管系統(tǒng)形成的整

2、個過程實際上是血管內皮細胞與其周圍細胞相互作用的過程，血管內皮細胞是血管生成的中心細胞。 為了探討血管內皮細胞分化機制，我們從發(fā)育至三體節(jié)的雞胚中克隆一些血管內皮(前體)細胞特異表達的基因。我選擇新近在小鼠新發(fā)現(xiàn)的血管內皮鋅指轉錄因子-1(Vezfl)的同源基因進行研究，該基因被報道在早齡鼠胚的血管內皮及其前體細胞中特異性表達。期望對雞Vezf1基因的功能分析，進一步揭示血管內皮細胞分化及血管形成的細胞與分子機制。 我們

3、首次采用RNAi技術在雞胚上對Vezfl的功能進行研究，并通過免疫磁珠的方法分離雞血管內皮祖細胞研究Vezf1對其分化的影響。我們針對VezflmRNA序列，構建Vezf1的干擾載體pPRIME-CMV-GFP-cVEZF1-microRNA，通過三質粒系統(tǒng)在293T細胞中包裝成病毒顆粒，用病毒體外感染雞血管內皮祖細胞和感染早期活體雞胚，取得如下結果： 1、成功構建雞Vezf1 RNAi系統(tǒng)pPRIME-CMV-GFP-cVEZ

4、F1-microRNA重組質粒，在雞胚細胞中檢測其基因沉默效率達75％左右。 2、對不同時期的早期雞胚做Whole-mount原位雜交，分析了cVezf1 mRNA的動態(tài)表達情況。 3、制備了兔抗雞VEZF1多克隆抗體，經(jīng)Elisa檢測抗體滴度達10000以上。 4、用Dynal免疫磁珠法成功分離原代雞內皮祖細胞，純度達90％以上。 5、雙色免疫組化證實了VEZF1在雞內皮細胞中表達。 6、雞胚活