MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及凋亡蛋白在子癇前期中的研究.pdf

1、子癇前期（PE）多發(fā)生于妊娠20周后，以高血壓和蛋白尿為主要特征，伴全身多器官功能損害或功能衰竭，嚴(yán)重者可出現(xiàn)抽搐、昏迷，甚至死亡。目前，誘發(fā)子癇前期的病因及病理機制仍是圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)中廣泛研究的重要課題。因此，子癇前期中胎盤組織內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的改變，是研究PE發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵性環(huán)節(jié)之一。
　　促分裂素原活化蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinases,MAPK）是廣泛存在于真核生物細(xì)胞內(nèi)的一類絲氨酸／蘇氨酸蛋

2、白激酶，其家族主要由c-Jun-N-終端激酶（JNK）、p38激酶和細(xì)胞外信號轉(zhuǎn)導(dǎo)激酶（ERK）等組成。MAPK通過將細(xì)胞外的刺激信號傳導(dǎo)至細(xì)胞內(nèi)，從而引起細(xì)胞發(fā)生增殖、分化、轉(zhuǎn)化及凋亡等生物學(xué)反應(yīng)。ERK主要介導(dǎo)細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)化，而JNK和p38則與細(xì)胞損傷、炎癥、梗死、氧化應(yīng)激反應(yīng)密切有關(guān)，三者之間既各自獨立，也相互作用，共同參與完成細(xì)胞內(nèi)各種信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)。
　　子宮螺旋動脈和管腔中滋養(yǎng)細(xì)胞層的重鑄障礙，導(dǎo)致胎盤缺氧缺血灌注

3、不足，胎盤炎性因子等過度激活，使得滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等發(fā)生功能障礙，最終導(dǎo)致PE發(fā)生。通過以往對子癇前期胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞的體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，p-ERK的表達(dá)較正常下降而p-p38的表達(dá)卻與滋養(yǎng)細(xì)胞毫無關(guān)系。然而通過動物實驗發(fā)現(xiàn)p38α的高表達(dá)與胎盤的形成缺陷相關(guān)，可引起胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞凋亡增加，最終導(dǎo)致胎鼠的死亡率上升。因此，PE中MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白對滋養(yǎng)細(xì)胞的調(diào)節(jié)仍需進(jìn)一步研究。
　　本課題以子癇前期和正常妊娠婦女的血清

4、和胎盤組織進(jìn)行研究，檢測PE組和正常妊娠組血清中TNF-α、IL-6，胎盤組織中MAPK轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白（p38、JNK、ERK）、凋亡蛋白以及MMP-9和TIMP-1的表達(dá)。通過對MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及凋亡蛋白的研究，探明引發(fā)子癇前期的主要靶蛋白，為子癇前期發(fā)生的病理機制及病理生理學(xué)研究提供實驗依據(jù)。本研究總共包括三個部分：
　　實驗一子癇前期患者胎盤組織中MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)
　　目的：研究在子癇前期外周血

5、腫瘤壞死因子TNF-α與胎盤組織MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白的相關(guān)性，探明子癇前期的主要靶蛋白，為子癇前期的病理機制提供依據(jù)。方法：采用病例對照研究，選擇西京醫(yī)院婦產(chǎn)科住院分娩的子癇前期孕婦和正常妊娠婦女各45例，通過ELISA分析兩組孕婦血清中TNF-α、IL-6，免疫組化與蛋白印記檢測胎盤組織中MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白以及NF-κBp65、c-fos、c-Jun，并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果：（1）子癇前期血清中TNF-α、IL-6水

6、平明顯高于正常妊娠組1.56±0.3vs0.85±0.1pg/ml、95.31±1.38vs56.40±1.45pg/ml，P<0.01；(2)子癇前期組胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞中p-p38、p-JNK的表達(dá)均高于正常妊娠組（P<0.01），而p-ERK的表達(dá)則低于正常妊娠組（P<0.01），MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下游分子NF-κBp65、c-fos、c-Jun在子癇前期組表達(dá)均增高（P<0.01）；（3）子癇前期血清TNF-α的表達(dá)與胎盤組織p-p

7、38、p-JNK表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.623p＜0.01、r=0.715,p＜0.01），與p-ERK的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.689,p<0.01）。結(jié)論：MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白在子癇前期的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用，p-p38、p-JNK通過NF-κBp65、c-fos、c-Jun入核呈正反饋參與子癇前期的發(fā)病機制。血清TNF-α的變化可以間接反應(yīng)胎盤組織中p-p38、p-JNK蛋白的變化情況。
　　實驗二凋亡蛋白在子癇前期

8、患者胎盤中的表達(dá)
　　目的：研究半胱天冬氨酸蛋白酶-3.8.9（Caspase-3.8.9）在子癇前期患者胎盤中的表達(dá)。方法：選擇2010年8月-2011年2月在西京醫(yī)院婦產(chǎn)科住院分娩的孕婦40例，分為子癇前期組20例、正常妊娠(對照)組20例，采用免疫組化法、蛋白印跡法檢測子癇前期患者和正常妊娠婦女胎盤中Fas/FasL、Caspase-3.8.9以及Bcl-2/Bax的表達(dá)。結(jié)果：Caspase-3.8.9在子癇前期胎盤和正常

9、妊娠胎盤中均有表達(dá)；在子癇前期患者胎盤中，F(xiàn)as/FasL、Caspase-3.8.9表達(dá)與正常胎盤相比顯著升高(P<0.01)，而Bcl-2/Bax則低于其在正常胎盤中的比例（P<0.01）。結(jié)論：子癇前期患者胎盤組織中滋養(yǎng)細(xì)胞可通過Fas/FasL轉(zhuǎn)導(dǎo)作用于Caspase-3.8.9高表達(dá)，線粒體Bcl-2/Bax比例失衡，導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡增加。高表達(dá)Caspase-3.8.9、Bcl/Bax比例失衡誘導(dǎo)子癇前期患者胎盤組織滋養(yǎng)細(xì)胞

10、凋亡增加，可能是子癇前期發(fā)生的重要病理因素。
　　實驗三MMP-9和TIMP-1在子癇前期患者胎盤組織中的表達(dá)
　　目的：研究基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrixmetalloproteinases-9，MMP-9）和金屬蛋白酶組織抑制因子-1（tissueinhibitorofmetalloproteinases-1，TIMP-1）在重度子癇前期患者胎盤中的表達(dá)。方法：選擇2010年8月-2011年2月在西京醫(yī)院婦產(chǎn)科住院分娩

11、的孕婦40例，分為子癇前期組20例、正常妊娠(對照)組20例，采用免疫組化法、蛋白印跡法檢測子癇前期患者和正常妊娠婦女胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞中MMP-9、TIMP-1的表達(dá)。結(jié)果：在子癇前期組胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞MMP-9的表達(dá)比正常胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞中顯著下降(P<0.01)，TIMP-1的表達(dá)則比正常胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞中顯著升高(P<0.01)，且MMP-9/TIMP-1的比值明顯低于正常妊娠胎盤中的表達(dá)。結(jié)論：子癇前期患者胎盤組織中MMP-9、TIMP-1的異