玻璃化冷凍牛卵母細(xì)胞受精能力研究.pdf

1、本試驗(yàn)從屠宰場(chǎng)廢棄的牛卵巢表面抽取直徑在2～6mm的卵泡的卵泡液，并從卵泡液中分揀出外被多層卵丘細(xì)胞的卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(COCs)，直接對(duì)COCs或者體外成熟培養(yǎng)后的卵母細(xì)胞采用不同的玻璃化冷凍方法進(jìn)行冷凍保存，然后利用體外受精(IVF)和胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)兩種方法對(duì)玻璃化冷凍卵母細(xì)胞的受精能力進(jìn)行了比較研究，旨在建立能夠進(jìn)一步提高牛冷凍卵母細(xì)胞受精能力的改進(jìn)方案，使卵母細(xì)胞冷凍技術(shù)上升到與胚胎冷凍同樣成熟的水平。

2、1 減輕損傷方案對(duì)冷凍卵母細(xì)胞IVF的影響 使用選擇合適時(shí)期的卵母細(xì)胞進(jìn)行冷凍；采用最小樣本量玻璃化冷凍方法進(jìn)行冷凍；在解凍后先孵育再進(jìn)行體外受精等三種方案能夠部分維持或恢復(fù)冷凍牛卵母細(xì)胞IVF受精能力。選擇成熟培養(yǎng)的卵母細(xì)胞進(jìn)行冷凍，其卵裂率顯著高于直接冷凍的卵泡卵母細(xì)胞(GMP組P<0.01(19.5％vs 11.6％)，straw組P<0.05(17.6％vs 10.3％))。選擇GMP法作為冷凍方法，其與straw法相比

3、，前者冷凍的卵泡卵母細(xì)胞(11.6％vs10.3％)和成熟卵母細(xì)胞(19.5％vs 17.6％)的卵裂率均優(yōu)于后者，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。選擇解凍后孵育lh和3h組，其受精率顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，孵育1h、2h、3h組之間受精率無(wú)顯著差異(P>0.05)，同樣，它們之間的卵裂率也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異(P>0.05)，但在數(shù)值上呈現(xiàn)遞減趨勢(shì)，并且都比對(duì)照組要高，但也無(wú)顯著差異(P>0.05)。 2 直接穿透透明帶的

4、ICSI技術(shù)探討 在ICSI方面的研究結(jié)果表明，選擇DTT進(jìn)行受精前精子處理得到的受精率和卵裂效果優(yōu)于其它各組，與對(duì)照組差異顯著(P<0.05)，與其它兩個(gè)添加組差異不顯著(P>0.05)，而對(duì)應(yīng)的冷凍卵母細(xì)胞IVF前精子處理結(jié)果表明，肝素組的受精率和卵裂率顯著高于咖啡因組(P<0.05)和對(duì)照組(P<0.01)，但與DTT組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。由于本試驗(yàn)是針對(duì)受精能力的研究，因此要盡量排除孤雌胚的影響，通過(guò)對(duì)受精卵母

5、細(xì)胞進(jìn)行篩選，在一定程度上減少了由于激活處理而導(dǎo)致的大量孤雌胚對(duì)卵裂率的干擾，但也因此使ICSI的卵裂率均低于IVF中的對(duì)應(yīng)處理組。另外，不同注射方法的研究表明，電壓和氣壓法的卵裂率顯著高于油壓法(P<0.05)，電壓法效果最好，但與氣壓法無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 3 冷凍卵母細(xì)胞ICSI和IVF受精效果比較研究 IVF和ICSI的對(duì)比研究表明，無(wú)論是新鮮的還是冷凍的卵母細(xì)胞，IVF的受精率和卵裂率均顯著高于對(duì)應(yīng)的

6、ICSI組(均為P<0.1)。在IVF組中，新鮮卵母細(xì)胞的受精率和卵裂率均顯著高于冷凍組(P<0.01)。但在ICSI組中，新鮮和冷凍卵母細(xì)胞組的受精率和卵裂率均無(wú)顯著差異(P>0.05)。換個(gè)角度比較，把新鮮卵母細(xì)胞IVF和ICSI得到的卵裂率均設(shè)為1，冷凍卵母細(xì)胞IVF和ICSI得到的卵裂率則對(duì)應(yīng)的比值分別為0.529和0.928。可見(jiàn)ICSI與IVF相比，由于前者能夠直接穿透透明帶，因此能夠有效地克服因冷凍而造成的透明帶硬化，從而