水牛卵母細(xì)胞快速玻璃化冷凍保存的研究.pdf

1、Y937。92單位代碼!Q墮學(xué)號2QQ3Q2西南蟲學(xué)碩士學(xué)位論文水牛卵母細(xì)胞快速玻璃化冷凍保存的研究論文作者：唐業(yè)剛指導(dǎo)教師：李躍民教授學(xué)科專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)研究方向：動(dòng)物胚胎工程提交論文日期：2006年5月論文答辯日期：2006年6月學(xué)位授予單位：西南大學(xué)中國重慶2006年5月日日西南人學(xué)碩：Ij學(xué)位論文摘要用B、C作為冷凍載體。2滲透性冷凍保護(hù)劑DMSO對水牛卵母細(xì)胞快速玻璃化冷凍保存效果的影響。分別采用含DMSO(分為A、B組：A組

2、在Vs中處理30s，B組在VS中處理4min)和不含DMSO的玻璃化液(C組)冷凍保存體外成熟培養(yǎng)18h的牛卵母細(xì)胞。解凍后A、B、C三組卵母細(xì)胞形態(tài)止常率無明顯著異(分別為：944％、926％、945％)。成熟率分別為50O％、418％、527％，其中B維顯著低丁A、C組，表明DMSO疑時(shí)間預(yù)處理會對水牛卵母細(xì)胞造成很大的毒性損傷；B組卵母細(xì)胞卵裂率也顯著低于A、C組(296％Vs356％、364％)，這表明卵母細(xì)胞后續(xù)發(fā)育能力受到了

3、DMSO陳時(shí)間作用的嚴(yán)重影響。A組(含DMSO)在成熟率(500％Vs527％)、卵裂率(352％Vs364％)上低于C組(不含DMSO)，但差異并不顯著，說明在快速玻璃化冷凍水牛卵母細(xì)胞中，DMSO對卵母細(xì)胞的毒性作用是可以通過縮短預(yù)處理的時(shí)間米減輕的。3血清(20％FBS)對水牛卵母細(xì)胞快速玻璃化冷凍保存效果的影響。分別采用含血清(20％FBS)和不含血清的玻璃化液，快速冷凍保存體外成熟培養(yǎng)18h的牛卵母細(xì)胞，結(jié)果表明：在形態(tài)正常率

4、上，有血消組略高于無血清組(930％Vs914％)，但差異不顯著；在體外成熟率、2～4細(xì)胞率上均以含衄清組高(491％Vs466％、368％Vs345％、316％Vs293％)，但均無顯著差異。結(jié)果表明：血清(20％FBS)作為非滲透性冷凍保護(hù)劑的～種，對水牛卵母細(xì)胞快速玻璃化冷凍有保護(hù)作用，但這種保護(hù)作用并不顯著。4卵丘顆粒細(xì)胞對水牛卵母細(xì)胞快速玻璃化冷凍保存效果的影響。將體外成熟6h的卵匠卵母細(xì)胞分為3組：A組將完整的卵丘卵母細(xì)胞復(fù)

5、合體(COCs)用實(shí)驗(yàn)2中不含DMSO的冷凍液直接行快速玻璃化冷凍，B組去掉卵丘顆粒細(xì)胞后如A組方法行快速冷凍，C組為COCs不經(jīng)玲凍的對照組。統(tǒng)計(jì)卵細(xì)胞解凍后的發(fā)育情況后發(fā)現(xiàn)：c組體外成熟率、卵裂率均顯著高丁A組及B組(65O％Vs492％，467％、417％Vs322％，30O％)，說明冷凍對水牛卵母細(xì)胞造成了損傷，此外還提示卵丘顆粒細(xì)胞有可能在快速冷凍過程中受到了一定損傷。A組平B紐的成熟率(492％vs467％)、卵裂率(320

6、％Vs30，O％)無顯著差異則明確表明了|卵丘顆粒細(xì)胞在冷凍中受到了損傷。A組在成熟率、卵裂率上均高于B組，盡管差異不顯轉(zhuǎn)，但鑒丁卵丘顆粒細(xì)胞在卵母細(xì)胞成熟過程中的重要作劇，來成熟水牛卵母細(xì)胞的快速玻璃化冷凍還是應(yīng)該凍存完整的COCs。5水牛卵母細(xì)胞不同成熟階段對快速玻璃化冷凍效果的影響。分別快速冷凍體外成熟0h、8h、16h、22h的水牛卵母細(xì)胞，冷凍方法同4，二步法解凍屙補(bǔ)足剩余培養(yǎng)時(shí)間并行孤雌激活，統(tǒng)計(jì)解凍后卵形態(tài)正常率、成熟率、

7、214細(xì)胞、8細(xì)胞卵裂率。對l《王組蜘不經(jīng)冷凍直接IVM24h并行孤雌激活。結(jié)果表明：在解凍后卵母細(xì)胞形態(tài)上E常率上，IVM0、8、16、22h四繃均無顯著差異(942％0、943％、960％、962％)；在成熟率、2—4，8細(xì)胞卵裂率上IvM0h、IVM8h組無明顯差異(173％Vs加8％：115％Vs132％；77％Vs94％)，但均顯著低丁IVMl6、22h組(320％、220％、180％：396％、283％、245％)；IVM1