水牛卵母細胞快速玻璃化冷凍保存的研究.pdf

1、Y937。92單位代碼!Q墮學號2QQ3Q2西南蟲學碩士學位論文水牛卵母細胞快速玻璃化冷凍保存的研究論文作者：唐業(yè)剛指導教師：李躍民教授學科專業(yè)：細胞生物學研究方向：動物胚胎工程提交論文日期：2006年5月論文答辯日期：2006年6月學位授予單位：西南大學中國重慶2006年5月日日西南人學碩：Ij學位論文摘要用B、C作為冷凍載體。2滲透性冷凍保護劑DMSO對水牛卵母細胞快速玻璃化冷凍保存效果的影響。分別采用含DMSO(分為A、B組：A組

2、在Vs中處理30s，B組在VS中處理4min)和不含DMSO的玻璃化液(C組)冷凍保存體外成熟培養(yǎng)18h的牛卵母細胞。解凍后A、B、C三組卵母細胞形態(tài)止常率無明顯著異(分別為：944％、926％、945％)。成熟率分別為50O％、418％、527％，其中B維顯著低丁A、C組，表明DMSO疑時間預處理會對水牛卵母細胞造成很大的毒性損傷；B組卵母細胞卵裂率也顯著低于A、C組(296％Vs356％、364％)，這表明卵母細胞后續(xù)發(fā)育能力受到了

3、DMSO陳時間作用的嚴重影響。A組(含DMSO)在成熟率(500％Vs527％)、卵裂率(352％Vs364％)上低于C組(不含DMSO)，但差異并不顯著，說明在快速玻璃化冷凍水牛卵母細胞中，DMSO對卵母細胞的毒性作用是可以通過縮短預處理的時間米減輕的。3血清(20％FBS)對水牛卵母細胞快速玻璃化冷凍保存效果的影響。分別采用含血清(20％FBS)和不含血清的玻璃化液，快速冷凍保存體外成熟培養(yǎng)18h的牛卵母細胞，結果表明：在形態(tài)正常率

4、上，有血消組略高于無血清組(930％Vs914％)，但差異不顯著；在體外成熟率、2～4細胞率上均以含衄清組高(491％Vs466％、368％Vs345％、316％Vs293％)，但均無顯著差異。結果表明：血清(20％FBS)作為非滲透性冷凍保護劑的～種，對水牛卵母細胞快速玻璃化冷凍有保護作用，但這種保護作用并不顯著。4卵丘顆粒細胞對水牛卵母細胞快速玻璃化冷凍保存效果的影響。將體外成熟6h的卵匠卵母細胞分為3組：A組將完整的卵丘卵母細胞復

5、合體(COCs)用實驗2中不含DMSO的冷凍液直接行快速玻璃化冷凍，B組去掉卵丘顆粒細胞后如A組方法行快速冷凍，C組為COCs不經(jīng)玲凍的對照組。統(tǒng)計卵細胞解凍后的發(fā)育情況后發(fā)現(xiàn)：c組體外成熟率、卵裂率均顯著高丁A組及B組(65O％Vs492％，467％、417％Vs322％，30O％)，說明冷凍對水牛卵母細胞造成了損傷，此外還提示卵丘顆粒細胞有可能在快速冷凍過程中受到了一定損傷。A組平B紐的成熟率(492％vs467％)、卵裂率(320

6、％Vs30，O％)無顯著差異則明確表明了|卵丘顆粒細胞在冷凍中受到了損傷。A組在成熟率、卵裂率上均高于B組，盡管差異不顯轉，但鑒丁卵丘顆粒細胞在卵母細胞成熟過程中的重要作劇，來成熟水牛卵母細胞的快速玻璃化冷凍還是應該凍存完整的COCs。5水牛卵母細胞不同成熟階段對快速玻璃化冷凍效果的影響。分別快速冷凍體外成熟0h、8h、16h、22h的水牛卵母細胞，冷凍方法同4，二步法解凍屙補足剩余培養(yǎng)時間并行孤雌激活，統(tǒng)計解凍后卵形態(tài)正常率、成熟率、

7、214細胞、8細胞卵裂率。對l《王組蜘不經(jīng)冷凍直接IVM24h并行孤雌激活。結果表明：在解凍后卵母細胞形態(tài)上E常率上，IVM0、8、16、22h四繃均無顯著差異(942％0、943％、960％、962％)；在成熟率、2—4，8細胞卵裂率上IvM0h、IVM8h組無明顯差異(173％Vs加8％：115％Vs132％；77％Vs94％)，但均顯著低丁IVMl6、22h組(320％、220％、180％：396％、283％、245％)；IVM1