SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞源性微囊泡對軟骨細胞增殖活性及表型的影響.pdf

1、研究目的：
　?。?）全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)SD大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs），并鑒定所提取的BMSCs的分化潛能及表面特征性分子；
　?。?）探索提取及鑒定SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞源性微囊泡（bone marrow mesenchymal stem cells-derived microvesicles, BMSCs-MVs）的方法；
　　

2、（3）將SD大鼠BMSCs-MVs和SD大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細胞體外共培養(yǎng)，探究BMSCs-MVs對SD大鼠軟骨細胞增殖狀態(tài)及表型的影響；
　　研究方法：
　?。?）分離、培養(yǎng)SD大鼠BMSCs，用誘導干細胞分化及流式細胞技術(shù)（Flow Cytometry, FCM)分析細胞表面標志分子的方法對SD大鼠BMSCs進行鑒定；
　　（2）用超速離心法從 SD大鼠 BMSCs培養(yǎng)上清液中提取微囊泡（microvesicles,MV

3、s）并用電鏡鑒定其形態(tài)；
　?。?）分離、培養(yǎng)2月齡SD大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細胞；
　　（4）所提取MVs與第3代軟骨細胞進行共培養(yǎng)，用EdU、CCK-8試劑盒檢測軟骨細胞的增值活性，RT-PCR方法檢測軟骨細胞的分子合成及代謝活動變化。
　　實驗結(jié)果：
　?。?）通過誘導BMSCs多向分化及流式細胞分析細胞表面標志分子的方法鑒定所提取SD大鼠BMSCs，發(fā)現(xiàn)分離培養(yǎng)的BMSCs在體外可被誘導分化為軟骨及脂肪細胞，流式

4、細胞術(shù)分析顯示所培養(yǎng)的SD大鼠BMSCs群體表達CD29、CD90分子其陽性率分別為98.7％、99.2%，而CD45、CD11b分子陽性率分別為3.0%、0.2%；
　?。?）用EdU、CCK-8試劑盒檢測與BMSCs-MVs共培養(yǎng)軟骨細胞的增值活性，結(jié)果顯示與BMSCs-MVs共培養(yǎng)的軟骨細胞相對于對照組增殖明顯（P<0.01）,且BMSCs-MVs劑量越高，促進增殖效應越強（P<0.01）；
　　（3）RT-PCR檢測

5、發(fā)現(xiàn)，相對于對照組，實驗組軟骨細胞的蛋白聚糖Acan、Ⅱ型膠原的表達增強，而Ⅹ型膠原、MMP-3、IL-1β的表達下降。
　　研究結(jié)論：
　?。?）體外共培養(yǎng)時，SD大鼠BMSCs-MVs具有促進膝關(guān)節(jié)軟骨細胞的增殖的作用；
　　（2）體外共培養(yǎng)時，SD大鼠BMSCs-MVs能夠增強膝關(guān)節(jié)表面軟骨細胞蛋白聚糖（Acan）、Ⅱ型膠原分子的表達，同時抑制Ⅹ型膠原、MMP-3及IL-1β的表達，表明BMSCs-MVs可能有利