骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞源性微囊泡對SD大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨損傷修復(fù)的影響.pdf

1、研究目的：
　　構(gòu)建大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型，關(guān)節(jié)腔內(nèi)分別注射生理鹽水、BMSCs-MVs和BMSCs，通過檢測修復(fù)軟骨組織中的相關(guān)因子含量變化，比較各組軟骨損傷的修復(fù)效果，探討B(tài)MSCs-MVs對軟骨組織損傷修復(fù)的影響。
　　研究方法：
　　1、全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)SD大鼠的BMSCs并鑒定；
　　2、用超速離心法從上述BMSCs培養(yǎng)液中提取微囊泡（microvesicles,MVs）并用電鏡觀察其形態(tài)；

2、>　　3、構(gòu)建SD大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型，隨機(jī)分為六個大組（每組6只）：假手術(shù)組、生理鹽水組、BMSCs組、BMSCs- MVs組（高、中、低3個劑量組）。每組雙膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射分別注射不同實(shí)驗(yàn)試劑，每周注射1次，連續(xù)4、8次，每組分別于注射4周、8周后各處死3只，收集標(biāo)本備用；
　　4、修復(fù)組織的大體觀察；組織切片染色（HE、糖原染色、甲苯胺藍(lán)染色）；免疫組化觀察修復(fù)區(qū)Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原、MMP-13含量;修復(fù)組織Wakitani

3、組織學(xué)評分；RT-PCR修復(fù)軟骨組織Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原、MMP-13含量測定。
　　5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:本研究全部數(shù)據(jù)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用單因素方差分析行多組間比較，卡方檢驗(yàn)行兩組間比較，P＜0.05為差異有顯著性意義。
　　結(jié)果：
　　1.大體觀，BMSCs組、低劑量組缺損填充較完整、有光澤、邊緣整齊，與周圍組織界限難以區(qū)分；
　　2.低劑量組Ⅱ型膠原表達(dá)為陽性，糖胺多糖含

4、量較假手術(shù)組減少，較生理鹽水組增多，Ⅹ型膠原、MMP-13含量較間充質(zhì)干細(xì)胞組、生理鹽水組減少；
　　3.低劑量組改良 Wakitani評分術(shù)后6周、10周低于生理鹽水組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），高于間充質(zhì)干細(xì)胞組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；術(shù)后6周與術(shù)后10周相比，生理鹽水組、低劑量組、間充質(zhì)干細(xì)胞組Wakitani評分均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；
　　4.低劑量組術(shù)后6周、10周COL-