

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、肺動(dòng)脈高壓(Pulmonary hypertension,PH)是多種病因?qū)е碌囊淮箢惣膊?,主要表現(xiàn)為肺動(dòng)脈壓力升高和肺血管阻力增高,進(jìn)一步發(fā)展至右心衰竭,最終導(dǎo)致死亡。低氧是PH發(fā)生和發(fā)展的一個(gè)重要原因,所以低氧性肺動(dòng)脈高壓( Hypoxic pulmonary hypertension,HPH)的發(fā)病機(jī)制一直是研究熱點(diǎn)。HPH特征性病理表現(xiàn)為肺血管平滑肌細(xì)胞增殖和肺血管重構(gòu)。研究肺血管重構(gòu)的分子機(jī)制,找出能夠抑制和逆轉(zhuǎn)肺血管重構(gòu)發(fā)生
2、的關(guān)鍵分子通路,進(jìn)而從根本上防治HPH的發(fā)生和發(fā)展是本課題的研究重點(diǎn)。
低氧性肺動(dòng)脈高壓的肺組織中PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路顯著活化,提示該信號(hào)通路在HPH中發(fā)揮了重要作用;文獻(xiàn)報(bào)道HPH的肺組織中轉(zhuǎn)錄因子NF-κB顯著活化,CXC趨化因子受體-4(CXCChemokinereceptor-4,CXCR4)的表達(dá)顯著升高。本課題重點(diǎn)闡述PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路與NF-κB活化以及CXCR4高表達(dá)之間的內(nèi)在聯(lián)系
3、;明確CXCR4抑制劑對(duì)HPH的治療作用,確立CXCR4為新型肺動(dòng)脈高壓治療的藥物靶點(diǎn)。
【目的】
?、僭诘脱跽T導(dǎo)的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(Pulmonary arterial smooth cells,PASMCs)中,闡明PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路與NF-κB、CXCR4的關(guān)系及具體的分子機(jī)制。
?、诿鞔_PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路及NF-κB、CXCR4在HPH肺血管平滑肌細(xì)胞遷移中的作用。
4、> ③明確CXCR4抑制劑對(duì)肺動(dòng)脈高壓的治療作用,確立CXCR4為肺動(dòng)脈高壓新型治療藥物靶點(diǎn)。
【方法和結(jié)果】
①我們首先用培養(yǎng)的原代PASMCs,模擬細(xì)胞損傷修復(fù)模型,給予低氧刺激后發(fā)現(xiàn)與常氧組對(duì)比低氧刺激可以促進(jìn)細(xì)胞的遷移。進(jìn)一步建立低氧誘導(dǎo)的PASMCs損傷修復(fù)模型,分別加入PI3K/mTOR雙抑制劑BEZ-235、mTORC1/C2雙抑制劑OSI-027、mTORC1抑制劑 Rapamycin,,結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)
5、胞遷移均受抑制。也就是說PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路對(duì)低氧誘導(dǎo)的PASMCs的遷移起到促進(jìn)作用。
?、谟肧D大鼠建立低壓低氧性肺動(dòng)脈高壓模型,4周后測(cè)定其右心室壓力及右心室肥厚指標(biāo)均較常氧組升高;各組肺小血管HE染色提示低氧組肺小血管管壁增厚。各組大鼠肺組織提取蛋白行Western-blot檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)AKT、mTOR與NF-κB在大鼠HPH肺組織中是活化的。
?、劢o予PASMCs低氧刺激后提蛋白行Western
6、 blot檢測(cè),發(fā)現(xiàn)與常氧組對(duì)比AKT、mTOR和NF-κB蛋白的磷酸化水平均增高。接著我們給予低氧誘導(dǎo)的PASMCs加入PI3K/AKT的抑制劑LY294002,mTOR和NF-κB蛋白的磷酸化水平均受抑制;而加入mTORC1的抑制劑Rapamycin后NF-κB的磷酸化水平受抑制,AKT的磷酸化水平無明顯變化;靶向抑制mTOR及mTORC1的構(gòu)架蛋白R(shí)aptor后,得到了同樣的結(jié)論。提示我們,在低氧誘導(dǎo)的PASMCs中,AKT/mT
7、OR信號(hào)通路促進(jìn)NF-κB轉(zhuǎn)錄因子的活化。
?、芪覀?cè)诘脱跽T導(dǎo)的PASMCs,采用免疫共沉淀方法確定了mTOR與IKKα可以相結(jié)合。靶向抑制低氧誘導(dǎo)的PASMCs細(xì)胞中的Raptor蛋白表達(dá)后,再用免疫共沉淀的技術(shù)免疫沉淀mTOR,結(jié)果發(fā)現(xiàn)IKKα是特異性結(jié)合mTORC1的。
?、菸覀冇迷囵B(yǎng)的PASMCs,給予低氧刺激后行Western-blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)與常氧組對(duì)比IKKα/β、IKBα的磷酸化水平增高。若給予低氧處
8、理的同時(shí)加入mTORC1的抑制劑Rapamycin后IKKα/β的磷酸化水平受抑制,靶向抑制mTORC1后,得到同樣結(jié)果。接著我們靶向抑制IKKα/β活性,發(fā)現(xiàn)IKBα和NF-κB蛋白的磷酸化水平與低氧對(duì)照組相比受抑制,這提示我們,在低氧誘導(dǎo)的PASMCs中, mTORC1活化了IKKα/β,IKKα/β的激活又使得下游分子IKBα和NF-κB進(jìn)一步激活。
?、尬覀兘酉聛碓诘脱跽T導(dǎo)的PASMCs中,靶向抑制NF-κB的表達(dá)后CX
9、CR4蛋白水平與低氧對(duì)照組相比下降;而過表達(dá)NF-κB后,CXCR4蛋白水平與低氧對(duì)照組相比增高。同樣我們采用RT-PCR的方法檢測(cè)NF-κB對(duì)CXCR4轉(zhuǎn)錄水平的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)CXCR4轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)同樣受到NF-κB的調(diào)控。接著,我們?cè)诮⒌牡脱跽T導(dǎo)的PASMCs損傷修復(fù)模型中,給予CXCR4的抑制劑AMD3100或者靶向抑制CXCR4后,結(jié)果發(fā)現(xiàn)抑制CXCR4的表達(dá)對(duì)低氧誘導(dǎo)的PASMCs損傷修復(fù)有抑制作用。這說明在低氧誘導(dǎo)的PA
10、SMCs中,NF-κB的活化調(diào)節(jié)CXCR4高表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)低氧誘導(dǎo)的PASMCs的損傷修復(fù)。
?、咴趧?dòng)物水平我們驗(yàn)證CXCR4在大鼠HPH中的作用。首先我們用Western blot技術(shù)及免疫組化染色技術(shù)均證明了CXCR4在大鼠低氧性肺動(dòng)脈高壓中是高表達(dá)的。在低壓低氧處理大鼠的同時(shí)給予CXCR4的抑制劑AMD3100,結(jié)果發(fā)現(xiàn)AMD3100注射組大鼠mRVP明顯較低氧組降低、右心室肥厚指標(biāo)明顯下降,肺組織HE染色提示,與低氧組相比
11、肺小血管壁肥厚程度也明顯減輕。由此得出結(jié)論:CXCR4抑制劑AMD3100可以抑制大鼠HPH形成,抑制肺血管與右心系統(tǒng)的重構(gòu)。
【結(jié)論】
通過本課題的研究,我們證實(shí)了AKT/mTOR信號(hào)通路活化可促進(jìn)PASMCs的損傷修復(fù);在低氧誘導(dǎo)的PASMCs中,我們發(fā)現(xiàn)mTORC1通過磷酸化調(diào)節(jié)IKKα/β使得NF-κB活化,活化的NF-κB又進(jìn)一步促進(jìn)CXCR4的表達(dá);CXCR4可促進(jìn)PASMCs的損傷修復(fù)與細(xì)胞遷移,CXC
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Ryanodine受體的研究.pdf
- 尼氟滅酸對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響.pdf
- 低氧誘導(dǎo)因子-1α在大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞及低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型中表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 高肺血流性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鈣激活氯通道的電生理研究.pdf
- 高肺血流性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞TMEM16A的表達(dá)與肺動(dòng)脈收縮力的關(guān)系.pdf
- survivin對(duì)高肺血流性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖與凋亡調(diào)控及其機(jī)制研究.pdf
- 慢性阻塞性肺疾病肺動(dòng)脈高壓肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖與凋亡的研究.pdf
- bca法測(cè)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈平滑肌sr膜蛋白濃度
- 5-HD對(duì)慢性低氧肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈平滑肌PKC-α表達(dá)的影響.pdf
- 阿托伐他汀對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞BMP-Smad信號(hào)通路的影響.pdf
- 5-HTT與肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡在左向右分流肺動(dòng)脈高壓大鼠中關(guān)系的研究.pdf
- 慢性低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)PTEN蛋白表達(dá)的變化.pdf
- 硼替佐米通過調(diào)節(jié)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)治療肺動(dòng)脈高壓.pdf
- 低氧肺動(dòng)脈高壓進(jìn)展
- HIMF在低氧誘導(dǎo)的大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的作用.pdf
- 黃芩苷對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈Ⅰ、Ⅲ型膠原的影響研究.pdf
- T16Ainh-A01對(duì)高肺血流性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖和遷移作用的研究.pdf
- 上調(diào)和激活肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞上的鈣敏感受體參與肺動(dòng)脈高壓發(fā)病機(jī)制的研究.pdf
- HIMF調(diào)控PI3K-Akt-mTOR通路對(duì)大鼠低氧性肺動(dòng)脈高壓的影響.pdf
- 動(dòng)力性肺動(dòng)脈高壓犬肺動(dòng)脈pcna及α┐平滑肌肌動(dòng)蛋白的表達(dá)
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論