γ-氨基丁酸對腸干細(xì)胞增殖分化的調(diào)節(jié)及在腸損傷中的保護(hù)作用的探究.pdf

1、目的:癌癥研究已經(jīng)在預(yù)防、早期診斷以及尋找惡性腫瘤特定的分子標(biāo)記上獲得了突出的成果。然而，如何防止因為使用化療手段治療晚期腫瘤轉(zhuǎn)移所引起的正常組織受損仍然有著很大的挑戰(zhàn)。γ氨基丁酸可以抑制神經(jīng)干細(xì)胞增殖，而本研究發(fā)現(xiàn)腸上皮表達(dá)γ氨基丁酸能信號系統(tǒng)，并且γ氨基丁酸參與調(diào)節(jié)腸上皮干細(xì)胞的增殖與分化。于是，我們嘗試檢測是否通過藥物干預(yù)γ氨基丁酸能信號系統(tǒng)可以促進(jìn)腸干細(xì)胞增殖來加速腸上皮的由于化療導(dǎo)致的損傷修復(fù)。
　　方法:利用免疫組織化

2、學(xué)技術(shù)確認(rèn)γ氨基丁酸A型及B型受體亞基、合成酶、轉(zhuǎn)運體和降解酶在小鼠及人腸上皮的表達(dá)分布;給予成年C57小鼠γ氨基丁酸A型受體激動劑muscimol、拮抗劑bicuculline、B型受體激動劑baclofen及拮抗劑CGP54626腹腔注射2周，取空腸組織做HE染色觀察腸形態(tài)，免疫組化染色分析比較暫時性增殖細(xì)胞數(shù)目、BrdU+細(xì)胞數(shù)目、杯狀細(xì)胞數(shù)目及凋亡細(xì)胞數(shù)目;給予成年C57小鼠連續(xù)5天治療劑量或單次大劑量5氟尿嘧啶腹腔注射建立腸損

3、傷模型，同時注射bicuculline或者CGP54626，取空腸組織做HE染色觀察腸形態(tài)，免疫組化染色分析比較暫時性增殖細(xì)胞數(shù)目、BrdU+細(xì)胞數(shù)目、杯狀細(xì)胞數(shù)目、凋亡細(xì)胞數(shù)目及γH2AX+細(xì)胞;利用免疫組化染色β-catenin探究Wnt信號通路，使用QPCR技術(shù)檢測常備干細(xì)胞標(biāo)志物lgr5、olfm4與儲備干細(xì)胞標(biāo)志物mTert、bmi mRNA相對表達(dá)量以及DNA損傷相關(guān)基因的mRNA相對表達(dá)量。
　　結(jié)果:1.GAD65

4、、GAD67、GAT3、GABAARα1、β1/2/3、GABABR1、GABABR2在腸上皮都有表達(dá)，且在隱窩表達(dá)較多，此外GABAARπ、α5、δ、γ2、GAT2均在腸上皮表達(dá)，而ABAT幾乎不在腸上皮表達(dá)。2.腹腔注射muscimol減少了絨毛長度、暫時性增殖細(xì)胞、杯狀細(xì)胞的數(shù)目，增加了凋亡細(xì)胞的數(shù)目;bicuculline增加了絨毛長度、杯狀細(xì)胞、潘氏細(xì)胞數(shù)目;baclofen減少了暫時性增殖細(xì)胞數(shù)目而CGP54626則增加了暫

5、時性增殖細(xì)胞數(shù)目。3.在化療藥物誘導(dǎo)的腸損傷模型中腹腔注射bicuculline或CGP54626相較生理鹽水減少了絨毛受損，增加了暫時性增殖細(xì)胞數(shù)目，減少了γH2AX+細(xì)胞的數(shù)目，olfm4、lgr5的mRNA相對表達(dá)量較高，而bmi1、mTert的mRNA相對表達(dá)量較低，注射CGP54646同時減少了干細(xì)胞的凋亡細(xì)胞數(shù)目，且gtf2h2與prkdc的mRNA表達(dá)量下降。
　　結(jié)論:1.γ氨基丁酸能信號系統(tǒng)存在于腸道上皮。2.γ