PEG-載體蛋白中載體蛋白免疫原性對PEG特異性抗體性質(zhì)的影響.pdf

1、聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)被廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)中，以提高藥物療效，并有多種PEG藥物投入臨床。但近期臨床試驗(yàn)研究顯示某些PEG藥物出現(xiàn)的臨床副反應(yīng)與PEG引起的免疫應(yīng)答有關(guān)。目前對PEG化脂質(zhì)體的PEG免疫反應(yīng)研究得比較成熟，但對PEG化蛋白的PEG免疫反應(yīng)比較少。研究PEG抗體的產(chǎn)生規(guī)律及對蛋白藥物代謝的影響對提高PEG蛋白藥物藥效具有重要意義。
　　本論文主要研究了PEG特異性抗體特性與所修飾載

2、體蛋白免疫原性的關(guān)系。
　　本論文以破傷風(fēng)類毒TT、牛血清白蛋白BSA、雞卵清蛋白OVA作為模型蛋白，并通過氨基修飾得到BSA-TT和TT-TT兩種偶聯(lián)蛋白，以BSA-TT、TT、TT-TT、OVA作為載體蛋白。通過動物免疫試驗(yàn)，四種載體蛋白免疫原性從高到底分別是TT-TT＞TT＞TT-BSA＞OVA。
　　采用化學(xué)修飾法將分子量為5000的PEG偶聯(lián)到載體蛋白上，通過凝膠純化得到PEG-載體蛋白修飾產(chǎn)物。本論文設(shè)計(jì)了兩類不

3、同PEG修飾水平載體蛋白。PEG修飾程度較高的包括TT-PEG-1、OVA-PEG。PEG修飾水平較低的包括BSA-TT-PEG、TT-TT-PEG、TT-PEG-2。并對產(chǎn)物進(jìn)行物理結(jié)構(gòu)表征分析。
　　將5種PEG-載體蛋白產(chǎn)物免疫動物。ELISA結(jié)果表明PEG-載體蛋白能在Balb/c小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生抗PEG抗體，抗體類型主要為IgM和IgG1，第7、21、35天的PEG抗體滴度依次升高。PEG-載體蛋白能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生PEG免疫

4、記憶。載體蛋白的免疫原性影響PEG免疫反應(yīng)強(qiáng)度，在一定范圍內(nèi)，載體蛋白免疫原性越強(qiáng)，誘導(dǎo)的PEG特異性抗體數(shù)量越多。載體蛋白免疫原性過強(qiáng)，產(chǎn)生載體蛋白抑制現(xiàn)象，抑制PEG抗體的產(chǎn)生。PEG修飾水平也影響抗PEG抗體的滴度，在本次研究中，TT-PEG-2的PEG修飾度低于TT-PEG-1修飾度，但前者產(chǎn)生的抗PEG抗體水平高于后者。
　　競爭性ELISA顯示所產(chǎn)生的抗體為PEG特異性抗體。
　　PEG多克隆抗體的制備:以TT-