黃粉蟲纖溶活性蛋白免疫原性與抗血栓作用的研究.pdf

1、黃粉蟲(Tenebrio molitor)又叫面包蟲，隸屬于鞘翅目，擬步行蟲科，粉蟲甲屬。原產(chǎn)北美洲，上世紀(jì)50年代由蘇聯(lián)引進(jìn)我國(guó)。黃粉蟲富含多種營(yíng)養(yǎng)成分，其干品含蛋白質(zhì)高達(dá)50％以上，被譽(yù)為“蛋白質(zhì)飼料寶庫(kù)”，此外還富含磷、鉀、鐵、鈉、鋁等常量元素和多種微量元素以及16種氨基酸。鑒于該蟲具有生存能力和適應(yīng)能力強(qiáng)、生長(zhǎng)發(fā)育快、養(yǎng)殖成本低等優(yōu)點(diǎn)，日益受到人們的青睞，目前在我國(guó)已成為繼養(yǎng)蠶、養(yǎng)蜂業(yè)外的第三大養(yǎng)殖業(yè)。
　　隨著我國(guó)人民生

2、活水平的不斷提高，健康長(zhǎng)壽已越來越成為人們的迫切需要。研究表明，血栓性疾病是近年來威脅人類健康的最嚴(yán)重疾病之一，其致殘率和死亡率極高，且該病的發(fā)病率與死亡率呈上升的趨勢(shì)，因此，預(yù)防血栓形成及血栓病的有效治療對(duì)于維護(hù)公眾健康，提高人類生存質(zhì)量有著極為重要的意義。
　　幾年來，本實(shí)驗(yàn)室從黃粉蟲體內(nèi)分離純化到一種具有強(qiáng)溶血栓活性的蛋白。本研究期望進(jìn)一步對(duì)該活性蛋白的一系列理化性狀以及免疫原性進(jìn)行檢測(cè)，為將其開發(fā)成為一種高效、安全的治療藥

3、物打下基礎(chǔ)。
　　本研究采用勻漿浸提、硫酸銨分段鹽析、陰離子交換層析等系列生化提取制備技術(shù)，從黃粉蟲幼蟲體內(nèi)分離純化得到一種纖溶活性蛋白(Tenebrio Fibrinolyric Proteins，TFP)，經(jīng)纖維平板法檢測(cè)其具有很強(qiáng)的纖溶作用，經(jīng)Brad fore法測(cè)得該蛋白濃度為7.7905mg·mL-1，聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)出其相對(duì)分子量約為54.3kD。
　　為了探討TFP的免疫原性，本文以小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用皮下

4、多點(diǎn)注射法進(jìn)行免疫試驗(yàn)，取血后分離血清，采用間接ELISA法檢測(cè)小鼠血清中的抗體含量及抗體效價(jià)。研究結(jié)果顯示黃粉蟲纖溶活性蛋白具有和尿激酶相似的免疫原性，末次免疫后產(chǎn)生的抗體效價(jià)為1∶640。說明TFP具有一定的免疫原性。
　　為了研究TFP在體內(nèi)的抗血栓作用，將TFP作用于角叉菜膠所致血栓的小鼠模型和正常小鼠，結(jié)果表明TFP能夠抑制角叉菜膠所致的小鼠尾部血栓的形成，;能明顯延長(zhǎng)正常小鼠凝血酶時(shí)間(TT)，增強(qiáng)其組織型纖溶酶原激活