炎性腸病大鼠胃腸動(dòng)力障礙及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　 在大鼠結(jié)腸炎模型基礎(chǔ)上，通過觀察SD大鼠結(jié)腸炎癥時(shí)，胃腸傳輸速率的變化，肌間神經(jīng)叢內(nèi)膽堿能和氮能神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)改變，電鏡下Cajal間質(zhì)細(xì)胞、肌間神經(jīng)、平滑肌以及三者間聯(lián)系的超微結(jié)構(gòu)變化，以及Cajal間質(zhì)細(xì)胞膜上特異性標(biāo)記c-kit蛋白表達(dá)的改變，探討炎性腸病大鼠胃腸動(dòng)力障礙的機(jī)制。
　　 方法：
　　 將40只SD大鼠按照隨機(jī)分配原則分成對(duì)照組和急性結(jié)腸炎組。急性結(jié)腸炎模型采用乙酸灌腸法制備，將

2、SD大鼠禁食不禁水24h后，用2％戊巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔注射麻醉，用聚乙烯導(dǎo)管插入大鼠結(jié)腸內(nèi)，插入深度約6～8cm，腸炎組大鼠向其腸腔快速注入50mL/L乙酸溶液0.5mL（對(duì)照組大鼠向其腸腔注入等量生理鹽水），讓大鼠處于頭低尾高位20s后，用生理鹽水快速?zèng)_洗結(jié)腸3次；造模第3天，兩組大鼠禁食24h，次日分別經(jīng)口灌入印度墨汁0.5mL，30min后麻醉，剖腹取出賁門至直腸末端快速測(cè)量墨汁在胃腸道的推進(jìn)長(zhǎng)度及胃腸道全長(zhǎng)的長(zhǎng)度，并

3、計(jì)算墨汁推進(jìn)百分比，即胃腸傳輸速率；分別取兩組大鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸組織標(biāo)本，固定，顯微鏡下分離外縱肌層，用AchE酶染色和NOS酶染色的組織化學(xué)方法觀察結(jié)腸肌間神經(jīng)叢內(nèi)膽堿能和氮能神經(jīng)的組織學(xué)改變；再取兩組大鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸組織標(biāo)本固定、脫水、包埋，常規(guī)半薄切片，超薄切片，硝酸鉛、醋酸鈾染色，用透射電鏡觀察Cajal間質(zhì)細(xì)胞、肌間神經(jīng)和平滑肌的超微結(jié)構(gòu)變化；采用WestonBlot方法檢測(cè)Cajal間質(zhì)細(xì)胞膜c-kit蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：

4、
　　 與對(duì)照組大鼠相比，急性結(jié)腸炎大鼠胃腸傳輸速度明顯減慢(P＜0.05)；其肌間神經(jīng)叢內(nèi)膽堿能和氮能神經(jīng)元的密度均明顯降低(P＜0.05)；電鏡下，對(duì)照組大鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸肌層超微結(jié)構(gòu)為：Cajal間質(zhì)細(xì)胞呈紡錘形，有巨大的卵圓形核及向外伸展的長(zhǎng)突起，胞質(zhì)內(nèi)有豐富的線粒體，大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；肌間神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)見較多的神經(jīng)分泌顆粒；平滑肌細(xì)胞內(nèi)大量排列整齊的肌絲，見豐富的密體和密斑，細(xì)胞膜緣有大量的質(zhì)膜內(nèi)褶，可見Cajal間

5、質(zhì)細(xì)胞與腸神經(jīng)元及平滑肌細(xì)胞之間緊密聯(lián)系。而急性腸炎組遠(yuǎn)端結(jié)腸肌層中Cajal間質(zhì)細(xì)胞體積增大．結(jié)構(gòu)破壞，電子密度降低，胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹、部分線粒體空泡樣變，溶酶體數(shù)目增多，并出現(xiàn)次級(jí)溶酶體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張；肌間神經(jīng)細(xì)胞胞漿內(nèi)的線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，溶酶體數(shù)量增加，神經(jīng)軸索水腫，微管結(jié)構(gòu)不清，神經(jīng)分泌顆粒減少；平滑肌細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)腫脹的線粒體，肌絲結(jié)構(gòu)不清，細(xì)胞膜小凹減少，甚至空泡形成，Cajal間質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)細(xì)胞及平滑肌間連接減少，連接松散

6、；Westernblot分析結(jié)果顯示對(duì)照組大鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸組織中Cajal間質(zhì)細(xì)胞c-kit蛋白質(zhì)呈陽(yáng)性表達(dá)，但與對(duì)照組相比，急性腸炎組c-kit蛋白質(zhì)的表達(dá)量顯著降低(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1．炎性腸病可導(dǎo)致胃腸動(dòng)力障礙即胃腸傳輸速率下降。
　　 2．引起炎性腸病大鼠胃腸動(dòng)力障礙的原因是多方面的：
　　 (1)與腸神經(jīng)系統(tǒng)(entericnervoussystem，ENS)的改變有關(guān)包括：肌

7、間神經(jīng)叢內(nèi)膽堿能和氮能神經(jīng)元的密度均明顯降低；肌問神經(jīng)細(xì)胞胞漿內(nèi)的線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，溶酶體數(shù)量增加，神經(jīng)軸索水腫，微管結(jié)構(gòu)不清，神經(jīng)分泌顆粒減少。
　　 (2)與Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICC)的改變有關(guān)包括：Cajal間質(zhì)細(xì)胞體積增大，結(jié)構(gòu)破壞，電子密度降低，胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹、部分線粒體空泡樣變，溶酶體數(shù)目增多，出現(xiàn)次級(jí)溶酶體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張；c-kit蛋白質(zhì)的表達(dá)量降低。
　　 (3)與平滑肌細(xì)胞的改變有關(guān)包括：平滑肌