紫蘇調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力障礙大鼠腸運(yùn)動(dòng)功能的機(jī)理研究.pdf

1、目的： 胃腸運(yùn)動(dòng)功能是消化系統(tǒng)最主要的生理功能之一。正常的胃腸運(yùn)動(dòng)不僅傳送食糜，而且推動(dòng)腸道內(nèi)細(xì)菌及其產(chǎn)物的排出，對(duì)胃腸道具有非特異免疫防御作用。已知，創(chuàng)傷、手術(shù)、放療、化療、嚴(yán)重感染等應(yīng)激狀態(tài)下，患者經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)腹脹、腹痛、惡心、嘔吐等一系列胃腸動(dòng)力障礙表現(xiàn)，早期使用藥物恢復(fù)胃腸道功能對(duì)疾病的恢復(fù)和預(yù)防并發(fā)癥是至關(guān)重要的。目前，研究發(fā)現(xiàn)造成胃腸動(dòng)力障礙的因素是多方面的，促進(jìn)胃腸動(dòng)力的西藥效果不佳，中藥治療取得了較好的臨床療效，具

2、有廣闊的應(yīng)用前景。 芳香類(lèi)中藥富含揮發(fā)油，能疏通氣機(jī)，宣化濕濁，消脹除痞，醒脾開(kāi)胃。藥理、藥效學(xué)研究證明，本類(lèi)藥物的揮發(fā)油與水溶液兩種組分均能不同程度刺激嗅覺(jué)、味覺(jué)及胃黏膜，增加胃粘膜血流、提高血清胃泌素水平和增強(qiáng)胃粘膜組織抗自由基損傷，保護(hù)應(yīng)激狀態(tài)下的腸粘膜屏障功能，并興奮腸管蠕動(dòng)，使胃腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)加快。提示芳香類(lèi)中藥具有促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)的功能。 紫蘇為芳香運(yùn)脾法的常用藥物，有芳香醒脾，和中開(kāi)胃的功效。紫蘇莖葉含揮發(fā)油0.3

3、%-0.7%，主要成分為紫蘇醛、檸檬烯、紫蘇酮等。紫蘇對(duì)于芳香運(yùn)脾，疏通中州，恢復(fù)脾胃受納運(yùn)化的臨床應(yīng)用效果顯著，但缺乏科學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。為進(jìn)一步探討芳香醒脾中藥調(diào)整胃腸運(yùn)動(dòng)的作用，揭示芳香藥物“運(yùn)脾”作用機(jī)理，我們選用紫蘇為代表，采用肢體缺血-再灌注模擬應(yīng)激導(dǎo)致的結(jié)腸動(dòng)力障礙模型，擬通過(guò)結(jié)腸動(dòng)力障礙觀察紫蘇梗水提液和紫蘇葉油對(duì)離體結(jié)腸平滑肌條收縮振幅、單個(gè)結(jié)腸平滑肌細(xì)胞長(zhǎng)度、細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度、細(xì)胞膜電位、Ca2+-ATPase活性以

4、及結(jié)腸平滑肌細(xì)胞膜流動(dòng)性等的影響，探討其促進(jìn)結(jié)腸收縮運(yùn)動(dòng)的作用機(jī)制。 方法： 1. 建立肢體缺血-再灌引發(fā)的胃腸動(dòng)力障礙模型，設(shè)立不同濃度中藥觀察組。 2. 制備大鼠離體結(jié)腸平滑肌環(huán)行肌條和離體單個(gè)結(jié)腸平滑肌細(xì)胞，通過(guò)觀察大鼠結(jié)腸平滑肌條收縮波平均振幅、結(jié)腸平滑肌細(xì)胞平均長(zhǎng)度的變化，探討紫蘇結(jié)腸收縮運(yùn)動(dòng)的作用和機(jī)制。 3. 通過(guò)采用激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)，測(cè)定結(jié)腸平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度和細(xì)胞膜電位，定磷

5、法測(cè)定胞內(nèi)Ca2+-ATPase活性，探討紫蘇對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響，以及鈣動(dòng)員的作用途徑，揭示紫蘇促進(jìn)結(jié)腸收縮運(yùn)動(dòng)的作用機(jī)理。 4. 測(cè)定結(jié)腸平滑肌細(xì)胞膜流動(dòng)性，觀察紫蘇對(duì)細(xì)胞膜的保護(hù)作用。 結(jié)果: 1. 肢體缺血-再灌注模型成功地模擬了應(yīng)激狀態(tài)下的結(jié)腸動(dòng)力障礙。再灌注12h后，大鼠結(jié)腸收縮波平均振幅、張力明顯下降（P<0.05，P<0.001）；并且大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞舒張，平均長(zhǎng)度明顯增加（P<0.05），

6、呈現(xiàn)結(jié)腸動(dòng)力障礙。模型大鼠出現(xiàn)結(jié)腸平滑肌細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i顯著下降，胞內(nèi)Ca2+-ATPase活性增加，細(xì)胞膜流動(dòng)性降低。 2. 紫蘇梗水提液和紫蘇葉油均能升高模型大鼠結(jié)腸平滑肌環(huán)行肌條的收縮波平均振幅，促進(jìn)結(jié)腸平滑肌的收縮。鈣通道阻斷劑鹽酸維拉帕米能夠抑制紫蘇兩種成分對(duì)結(jié)腸環(huán)行肌條收縮的增強(qiáng)效應(yīng)，鹽酸普萘洛爾僅抑制紫蘇梗水提液的肌條收縮效應(yīng)。膽堿能M受體阻斷劑阿托品對(duì)紫蘇兩種成分的結(jié)腸環(huán)行肌條收縮增強(qiáng)效應(yīng)無(wú)明顯影響。

7、 3. 紫蘇梗水提液和紫蘇葉油均能減少模型大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞平均長(zhǎng)度，增加平滑肌細(xì)胞的收縮率。鈣鰲合劑EGTA和鈣通道阻斷劑鹽酸維拉帕米對(duì)紫蘇兩種成分促進(jìn)結(jié)腸平滑肌細(xì)胞收縮作用均由明顯的抑制作用。 4. 紫蘇梗水提液和紫蘇葉油均可增加模型大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i。IP3受體拮抗劑Heparin和ryanodine受體拮抗劑Ruthenium Red均可抑制紫蘇梗水提液增加胞內(nèi)[Ca2+]i的作用。兩種受體拮抗劑均不能抑

8、制紫蘇葉油升高胞內(nèi)[Ca2+]i的作用。 5. 紫蘇梗水提液和紫蘇葉油均能降低模型大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞膜電位，減少胞內(nèi)Ca2+-ATPase活性（P<0.05，P=0.001）。 6紫蘇梗水提液和紫蘇葉油均可增加模型大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞膜流動(dòng)性（P<0.001）。 結(jié)論： 肢體缺血-再灌注模型成功模擬了應(yīng)激狀態(tài)下的結(jié)腸動(dòng)力障礙。紫蘇梗水提液和紫蘇葉油均可通過(guò)增加結(jié)腸平滑肌條收縮振幅和平滑肌細(xì)胞收縮率，升高胞內(nèi)

9、[Ca2+]i，達(dá)到促進(jìn)結(jié)腸收縮運(yùn)動(dòng)的作用。紫蘇兩種成分均可通過(guò)增強(qiáng)平滑肌細(xì)胞膜的去極化，促進(jìn)電壓依賴(lài)型鈣通道的開(kāi)放，抑制Ca2+-ATPase活性，從而升高細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i，增強(qiáng)結(jié)腸運(yùn)動(dòng)功能。紫蘇梗水提液促進(jìn)結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的機(jī)理還包括參與或調(diào)整腎上腺素能β受體途徑，通過(guò)IICR和CICR兩種胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放鈣途徑，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i的增加，以及參與第二信使IP3介導(dǎo)的肌醇脂質(zhì)信號(hào)系統(tǒng)對(duì)平滑肌收縮作用的調(diào)節(jié)。紫蘇兩種成分均能維持平滑肌細(xì)