治療性淺低溫(34℃)對肥厚心肌缺血再灌注損傷的影響及機制.pdf

1、目的：
　　觀察治療性淺低溫（34℃）對肥厚心肌的缺血再灌注損傷的影響，探討PI3K和NO途徑在肥厚心肌的缺血再灌注損傷的作用，觀察MMP-9、MMP-2及IL-1β在肥厚心肌缺血再灌注損傷中和PI3K、NO途徑之間可能的聯(lián)系。
　　方法：
　　成年健康雄性SD大鼠72只（由南昌大學(xué)動物研究中心提供），將其隨機分為6組：正常心肌對照組（Sham組，12只）、肥厚心肌對照組（Control組，12只）、心肌缺血再灌注組（

2、I/R組，12只）、34℃淺低溫心肌缺血再灌注組（34H+I/R組，12只）、34℃淺低溫心肌缺血再灌注+NOS抑制劑 L-NAME組（34H+I/R+L-NAME組，12只）、34℃淺低溫心肌缺血再灌注+PI3K抑制劑wortmannin組（34H+I/R+WORT組，12只）。Sham組：正常心肌大鼠組，不做任何處理；Control組、I/R組、34H+I/R組、34H+I/R+L-NAME組、34H+I/R+WORT組行腹主動脈縮

3、窄術(shù)后飼養(yǎng)兩月，建立經(jīng)典壓力負(fù)荷性心肌肥厚模型。Control組：不做I/R處理； I/R組：用37℃灌注液持續(xù)灌流大鼠心臟至平衡（30min）后，進行缺血30min，然后37℃灌注液進行再灌注120min；34H+I/R組：再灌注期，34℃灌注液進行再灌注120min；34H+I/R+L-NAME組：再灌注期，34℃灌注液（含NOS抑制劑L-NAME）進行再灌注120min；34H+I/R+WORT組：再灌注期，34℃灌注液（含PI3

4、K抑制劑 wortmannin）進行再灌注120min。記錄平衡缺血前（T0），再灌注15 min（T1），30min（T2），60min（T3），120min（T4）各時間點的心率（HR）、左心室收縮壓（LVSP）、左心室舒張末壓（LVEDP）、左心室內(nèi)壓升高的最大速率（ dp/dtmax）與左心室內(nèi)壓升高的最小速率（dp/dtmin）。測定心臟缺血前和再灌注期第15min、30min、60min以及120min流出的灌注液中心肌酶（

5、LDH、CK）的釋放量和NO值；在再灌注120min末，測定心臟肥厚指數(shù)；各組隨機取6只大鼠離體心臟用western blot測定PI3K、IL-1β、MMP-2及MMP-9蛋白含量，并各組隨機取6只大鼠離體心臟測定 TTC染色后的心肌梗死面積。
　　結(jié)果：
　　1、心臟肥厚指數(shù)的變化
　　Control組、I/R組、34H+I/R組、34H+I/R+L-NAME組及34H+I/R+WORT組的心臟肥厚指數(shù)明顯高于Sh

6、am組（P＜0.0l），Control組、I/R組、34H+I/R組、34H+I/R+L-NAME組及34H+I/R+WORT組間無明顯差異。
　　2、血流動力學(xué)參數(shù)的變化
　　各組平衡期血流動力學(xué)參數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與 I/R組相比，34H+I/R組在各時間點心率均明顯減少（P＜0.01）；I/R組、34H+I/R+L-NAME組、34H+I/R+WORT組之間，各組相同時間點心率差異沒有顯著性意義（P＞

7、0.05）
　　3、灌注液中心肌酶（LDH、CK）釋放量的比較
　　與I/R組比較，34H+I/R組的心肌酶釋放量顯著降低（P＜0.05）；與34H+I/R組相比，34H+I/R+WORT組與34H+I/R+L-NAME組的心肌酶釋放量顯著性升高（P＜0.05）
　　4、肥厚心肌缺血再灌注損傷后PI3K蛋白表達和NO生成水平的變化
　　34H+I/R組與I/R組相比，PI3K蛋白表達水平顯著升高（P＜0.05），

8、NO含量明顯增多；在34H+I/R+L-NAME組和34H+I/R+WORT組中，治療性淺低溫所造成的 PI3K蛋白的高表達被逆轉(zhuǎn)（P＜0.05），肥厚心肌 NO生成明顯減少（P＜0.05）。
　　5、心肌梗死面積的變化
　　與I/R組相比，34H+I/R組治療性淺低溫明顯縮小肥厚心肌大鼠心臟缺血再灌注損傷產(chǎn)生的心肌梗死面積（ P＜0.05）。與34H+I/R組相比，在34H+I/R+L-NAME組和34H+I/R+WORT

9、組心肌梗死面積在I/R損傷后顯著擴大（P＜0.05）。
　　6、肥厚心肌缺血再灌注損傷后MMP-2、MMP-9及IL-1β蛋白的表達
　　與Control對照組相比，I/R組肥厚心肌中MMP-2、MMP-9和IL-1β蛋白的表達顯著升高（P＜0.01）。MMP-2和MMP-9蛋白在34H+I/R組中的表達與I/R組無顯著性差異，而與I/R組相比，34H+I/R組中IL-1β表達明顯減少（P＜0.05）；34H+I/R+L-N

10、AME組和34H+I/R+WORT組，與34H+I/R組相比，MMP-2和MMP-9蛋白表達水平無顯著性改變（p＞0.05），而IL-1β的表達量有顯著性升高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、治療性淺低體溫可通過減少肥厚心肌組織 LDH和CK的釋放量，減少心肌梗死面積，從而對離體肥厚心肌缺血再灌注損傷產(chǎn)生保護作用；
　　2、NOS抑制劑 L-NAME和PI3K抑制劑wortmannin能逆轉(zhuǎn)治療性淺低溫對肥厚心肌