粒細胞集落刺激因子治療SD大鼠重型顱腦損傷的動物實驗.pdf

1、干細胞是機體內(nèi)存在的一類特殊細胞，它們顯著的生物學特性是既有自我更新的能力又具有多向分化的潛能，這種具有多潛能細胞存在于成年個體的許多組織和胚胎中。目前研究較為深入的干細胞主要有：骨髓干細胞（MSC）、神經(jīng)干細胞、胚胎干細胞。其中骨髓干細胞和神經(jīng)干細胞已被認為具有令人鼓舞的潛能。最先開展的骨髓干細胞移植的有諸多優(yōu)點：①MSC取材方便，培養(yǎng)簡單；②可靜脈注射，移植方便；③MSC具有多向分化功能，攜帶人體全部基因組，可同時對骨骼肌、心肌、神

2、經(jīng)系統(tǒng)等受損組織進行修復；④MSC易于被外源性基因轉染，便于基因操作，可能開展自體移植。然而，粒細胞集落刺激因子（G-CSF）動員MSC重新釋放入血，對病變組織進行修復，這種“自身移植”可有效減少異體移植的免疫排斥反應以及其操作方便，病人痛苦小、經(jīng)濟有效，并發(fā)癥少等優(yōu)點，更值得我們?nèi)ヌ接?、研究?目的：通過實驗觀察G-CSF動員MSC治療液化氮冷凍所致SD大鼠重型顱腦損傷動物模型，從免疫組化和神經(jīng)功能恢復兩方面觀察G-CSF對顱

3、腦損傷的治療效果。 材料和方法：應用G-CSF動員SD大鼠骨髓干細胞釋放入血，通過循環(huán)系統(tǒng)到達神經(jīng)系統(tǒng)的病.變組織，骨髓干細胞在特定環(huán)境下分化為神經(jīng)細胞，參與受損的神經(jīng)組織修復與功能重建。實驗采用雄性健康SD大鼠，體重200克左右。動物造模后選擇符合重型顱腦損傷標準的動物隨機分為三組：1、對照組給予三磷酸腺苷等；2、實驗組1給予G-CSF；3、實驗組2給予G-CSF同時給予丹參和神經(jīng)節(jié)苷脂（GM1）。各組用藥共2周。 分

4、別于術后每周對各組SD大鼠進行神經(jīng)損害程度評分，共一月。術后每周各處死2只大鼠，共四周，然后對大鼠腦組織進行免疫組化檢測，了解新生的神經(jīng)細胞分布情況。從神經(jīng)功能恢復和免疫組化兩方面觀察G-CSF對動物顱腦損傷的治療效果。 結果：本實驗對照組的第1、2、3、4周損傷區(qū)域可見1-2個nestin陽性細胞，損傷機體通過自身調(diào)節(jié)進行自身修復，由于動物自身干細胞數(shù)量不足，自身修復能力很差。單純用G-CSF實驗組各周在損傷區(qū)域可見的8-10

5、個nestin陽性細胞，與對照組組相比明顯增多。動物功能恢復程度也明顯高于對照組。 應用G-CSF、丹參和GM1的實驗動物比單純用G-CSF在各周損傷區(qū)域見到的nestin陽性細胞增多，功能恢復程度也明顯優(yōu)于后者。丹參有擴張血管、防止紅細胞凝集及抗血栓形成等作用，丹參使腦受損區(qū)血液供應量，有利于骨髓干細胞存活并進一步分化為神經(jīng)細胞。GM1是神經(jīng)細胞膜的組成成分，在神經(jīng)發(fā)生、生長、分化過程中起必不可少的作用，對干細胞的生存、生長具

6、有重要作用；同時對于損傷后的神經(jīng)修復也非常重要，具有促進神經(jīng)再生、促進神經(jīng)軸突生長和突觸形成、恢復神經(jīng)支配功能，即通過促進各種形態(tài)、生化、組化、神經(jīng)生理及行為參數(shù)的改善，最終可以加速神經(jīng)修復，最大程度地恢復原有的神經(jīng)功能。以上因素使實驗組2的動物比單純用G-CSF的實驗組1的功能恢復更好。 損傷側nestin陽性細胞數(shù)均值明顯高于未損傷側。可能與受損腦組織的微環(huán)境與未損傷側不同，干細胞具有向損傷區(qū)積聚的能力，因而促使骨髓干細胞更