粒細胞集落刺激因子治療SD大鼠重型顱腦損傷的動物實驗.pdf

1、干細胞是機體內(nèi)存在的一類特殊細胞，它們顯著的生物學(xué)特性是既有自我更新的能力又具有多向分化的潛能，這種具有多潛能細胞存在于成年個體的許多組織和胚胎中。目前研究較為深入的干細胞主要有：骨髓干細胞（MSC）、神經(jīng)干細胞、胚胎干細胞。其中骨髓干細胞和神經(jīng)干細胞已被認(rèn)為具有令人鼓舞的潛能。最先開展的骨髓干細胞移植的有諸多優(yōu)點：①MSC取材方便，培養(yǎng)簡單；②可靜脈注射，移植方便；③MSC具有多向分化功能，攜帶人體全部基因組，可同時對骨骼肌、心肌、神

2、經(jīng)系統(tǒng)等受損組織進行修復(fù)；④MSC易于被外源性基因轉(zhuǎn)染，便于基因操作，可能開展自體移植。然而，粒細胞集落刺激因子（G-CSF）動員MSC重新釋放入血，對病變組織進行修復(fù)，這種“自身移植”可有效減少異體移植的免疫排斥反應(yīng)以及其操作方便，病人痛苦小、經(jīng)濟有效，并發(fā)癥少等優(yōu)點，更值得我們?nèi)ヌ接?、研究?目的：通過實驗觀察G-CSF動員MSC治療液化氮冷凍所致SD大鼠重型顱腦損傷動物模型，從免疫組化和神經(jīng)功能恢復(fù)兩方面觀察G-CSF對顱

3、腦損傷的治療效果。 材料和方法：應(yīng)用G-CSF動員SD大鼠骨髓干細胞釋放入血，通過循環(huán)系統(tǒng)到達神經(jīng)系統(tǒng)的病.變組織，骨髓干細胞在特定環(huán)境下分化為神經(jīng)細胞，參與受損的神經(jīng)組織修復(fù)與功能重建。實驗采用雄性健康SD大鼠，體重200克左右。動物造模后選擇符合重型顱腦損傷標(biāo)準(zhǔn)的動物隨機分為三組：1、對照組給予三磷酸腺苷等；2、實驗組1給予G-CSF；3、實驗組2給予G-CSF同時給予丹參和神經(jīng)節(jié)苷脂（GM1）。各組用藥共2周。 分

4、別于術(shù)后每周對各組SD大鼠進行神經(jīng)損害程度評分，共一月。術(shù)后每周各處死2只大鼠，共四周，然后對大鼠腦組織進行免疫組化檢測，了解新生的神經(jīng)細胞分布情況。從神經(jīng)功能恢復(fù)和免疫組化兩方面觀察G-CSF對動物顱腦損傷的治療效果。 結(jié)果：本實驗對照組的第1、2、3、4周損傷區(qū)域可見1-2個nestin陽性細胞，損傷機體通過自身調(diào)節(jié)進行自身修復(fù)，由于動物自身干細胞數(shù)量不足，自身修復(fù)能力很差。單純用G-CSF實驗組各周在損傷區(qū)域可見的8-10

5、個nestin陽性細胞，與對照組組相比明顯增多。動物功能恢復(fù)程度也明顯高于對照組。 應(yīng)用G-CSF、丹參和GM1的實驗動物比單純用G-CSF在各周損傷區(qū)域見到的nestin陽性細胞增多，功能恢復(fù)程度也明顯優(yōu)于后者。丹參有擴張血管、防止紅細胞凝集及抗血栓形成等作用，丹參使腦受損區(qū)血液供應(yīng)量，有利于骨髓干細胞存活并進一步分化為神經(jīng)細胞。GM1是神經(jīng)細胞膜的組成成分，在神經(jīng)發(fā)生、生長、分化過程中起必不可少的作用，對干細胞的生存、生長具

6、有重要作用；同時對于損傷后的神經(jīng)修復(fù)也非常重要，具有促進神經(jīng)再生、促進神經(jīng)軸突生長和突觸形成、恢復(fù)神經(jīng)支配功能，即通過促進各種形態(tài)、生化、組化、神經(jīng)生理及行為參數(shù)的改善，最終可以加速神經(jīng)修復(fù)，最大程度地恢復(fù)原有的神經(jīng)功能。以上因素使實驗組2的動物比單純用G-CSF的實驗組1的功能恢復(fù)更好。 損傷側(cè)nestin陽性細胞數(shù)均值明顯高于未損傷側(cè)。可能與受損腦組織的微環(huán)境與未損傷側(cè)不同，干細胞具有向損傷區(qū)積聚的能力，因而促使骨髓干細胞更