粒細(xì)胞集落刺激因子治療新生大鼠重度缺氧缺血性腦病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：皮下注射粒細(xì)胞集落刺激因子(GranulocyteColony-StimulatingFactor,G-CSF)對(duì)新生大鼠重度缺氧缺血性腦損傷(HypoxicIschemicBrainDamage，HIBD)模型進(jìn)行治療，從神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能、整體水平和細(xì)胞水平觀察治療后大鼠的損傷恢復(fù)情況。從而研究G-CSF治療重度缺氧缺血性腦病(Hypoxic-IschemicEncephalopathy,HIE)的有關(guān)機(jī)制，為臨床治療提供一定的理論

2、基礎(chǔ)。 方法： 1.大鼠重度HIBD模型制作及鑒定7日齡SD乳鼠，麻醉后雙重結(jié)扎并剪斷左側(cè)頸總動(dòng)脈，恢復(fù)2～3小時(shí)后，放入8％O2+92％N2的容器中2.5小時(shí)，用水浴箱控制環(huán)境溫度在39℃左右。鑒定建模是否成功及損傷程度。 2.G-CSF治療HIE時(shí)間窗的選擇正常7日齡SD乳鼠皮下注射G-CSF，流式細(xì)胞儀檢測(cè)注射G-CSF后外周血CD34+/WBC的變化趨勢(shì)。 3.G-CSF治療HIE建模成功的乳鼠隨

3、機(jī)分為3組，雙時(shí)相組(HG2)、單時(shí)相組(HG1)和HIBD(H)組，按照A、B、C各組時(shí)間窗的選擇分別給予G-CSF，并采用累積法BrdU腹腔注射。 4.觀察療效設(shè)定時(shí)間點(diǎn)采用大鼠改良神經(jīng)功能缺陷評(píng)分(ModifiedNeurologicalSeverityScore，mNSS)法對(duì)各組大鼠進(jìn)行行為學(xué)觀察，并對(duì)其大腦進(jìn)行解剖及病理學(xué)觀察，檢測(cè)大腦梗死灶，神經(jīng)元排列情況，凋亡細(xì)胞數(shù)及新生神經(jīng)前體細(xì)胞、神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)目。

4、 結(jié)果： 1.模型鑒定HIBD后所有模型動(dòng)物行為異常，大腦重量減輕，可見(jiàn)明顯梗死灶。HE及Niss1染色可見(jiàn)神經(jīng)元排列紊亂，細(xì)胞腫脹，核仁及尼氏小體不清。損傷部位以皮層、海馬為甚。 2.運(yùn)動(dòng)功能建模完成后所有大鼠的mNSS評(píng)分較高。經(jīng)G-CSF治療14天后，治療組mNSS評(píng)分較對(duì)照組明顯降低，且HG2組評(píng)分較HG1組明顯減低。 3.腦重：經(jīng)G-CSF治療后大腦重量明顯增加，且HG2組大腦重量明顯高于HG1

5、組。TTC染色顯示G-CSF治療組平均梗死灶體積較對(duì)照組減小，且HG2組效果明顯優(yōu)于HG1組。 4.神經(jīng)元：采用HE及Niss1染色，可見(jiàn)G-CSF治療組神經(jīng)元較對(duì)照組排列整齊、有序，組織恢復(fù)較明顯。且HG2組較HG1組大腦細(xì)胞排列緊密，神經(jīng)元形態(tài)、結(jié)構(gòu)接近正常大腦，未見(jiàn)空泡形成，細(xì)胞內(nèi)布滿(mǎn)尼氏小體。 5.神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)：經(jīng)G-CSF治療后，腦缺血區(qū)域的凋亡神經(jīng)元減少了74.53％，而新生的神經(jīng)前體細(xì)胞、神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)

6、胞較對(duì)照組明顯增多。 結(jié)論： 1.本研究改良的建模方法表明，模型鼠的運(yùn)動(dòng)行為落后，大腦損傷程度較經(jīng)典的建模方法嚴(yán)重，動(dòng)物的死亡率比經(jīng)典建模方法高，提示本研究的改良建模方法成功可行，可供同行借鑒運(yùn)用。 2.SD乳鼠雙時(shí)相注射G-CSF后外周血造血干細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間維持較高水平，為造血干細(xì)胞向中樞神經(jīng)系統(tǒng)遷移提供了更多的細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)一步提高G-CSF的神經(jīng)保護(hù)作用。 3.G-CSF對(duì)新生大鼠的重度HIE具有良好的神