木瓜提取物對NAFLD模型小鼠脂質(zhì)代謝及相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　研究木瓜（Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai)提取物對非酒精性脂肪肝病干預(yù)保護作用，并探討其作用機制。
　　方法：
　　(1)木瓜醇提取物分離與鑒定：資木瓜用70％乙醇回流蒸發(fā)后過濾，懸蒸去乙醇，離心取上清置于大孔樹脂用乙醇濃度為0%、10%、30%、50%、70%分段洗脫，分段收集洗脫液并濃縮，分段洗脫液與已知標(biāo)準(zhǔn)品作高效液相圖譜（HPLC）比對分析。
　　(2)木瓜提

2、取物對細(xì)胞脂毒性干預(yù)的測定：應(yīng)用棕櫚酸（Palmitic acid,PA）作用于肝癌細(xì)胞系細(xì)胞（HepG2），建立PA誘導(dǎo)細(xì)胞脂毒性模型，加入不同濃度木瓜30%醇提取液，應(yīng)用結(jié)晶紫方法測定細(xì)胞密度、甘油三酯測定及尼羅紅流式分析，反映藥物的脂毒性干預(yù)作用。
　　(3)高糖高脂誘導(dǎo)非酒精性脂肪肝病小鼠模型及木瓜30%醇洗脫液干預(yù)作用：昆明鼠分為正常對照組,高糖高脂模型組，木瓜30%醇洗脫液低劑量(100mg/kg體重)組、中劑量組(2

3、00mg/kg體重)、高劑量組(300mg/kg體重)。正常對照組給與普通飼料，模型組和用藥組給與高糖高脂飼料，用藥組飼料為自制高糖高脂飼料及按用藥比例加入相應(yīng)木瓜30%醇洗脫液。4周處死小鼠檢測相應(yīng)生化指標(biāo)，肝臟HE染色、油紅O染色及β-半乳糖苷酶(β-Gal)染色觀察組織結(jié)構(gòu)變化，反映模型的建立及藥物干預(yù)作用；
　　(4)應(yīng)用RT-PCR和western blotting檢測培養(yǎng)細(xì)胞和小鼠肝臟組織脂質(zhì)代謝基因和蛋白表達(dá)，及細(xì)胞

4、衰老相關(guān)指標(biāo)的檢測。
　　結(jié)果：
　　(1)木瓜提取物制備及質(zhì)量控制：1000g資木瓜飲片經(jīng)過提取分離濃縮得到10%醇洗脫液組份3.90g、30%醇洗脫液組份17.29g、50%醇洗脫液組份37.50 g、70%醇洗脫液組份0.33 g；HPLC分析30%醇洗脫液組份在330nm特定條件下的指紋圖譜，其主峰與綠原酸高度相似，可以作為提取物質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，其他組份成分尚不明。
　　(2)結(jié)晶紫法檢測顯示PA對細(xì)胞毒性有劑量

5、依賴性，木瓜30%醇洗脫液改善PA對HepG2細(xì)胞生長抑制；木瓜30%醇洗脫液可以改善細(xì)胞周期阻滯作用（流式細(xì)胞學(xué)檢測），及P16、P21基因轉(zhuǎn)錄水平（RT-PCR）。
　　(3)木瓜30%醇洗脫液降低細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量、尼羅紅染色的熒光強度，改善脂質(zhì)在肝細(xì)胞的沉積。
　　(4)木瓜30%醇洗脫液可以明顯改善高糖高脂誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝病模型小鼠胰島素抵抗（糖耐量實驗），降低模型小鼠血糖血脂及轉(zhuǎn)氨酶水平。
　　(5)H

6、E染色、油紅O染色顯示木瓜30%醇洗脫液可以降低模型小鼠肝脂肪變性。
　　(6)木瓜30%醇洗脫液可以改善脂代謝紊亂，小鼠肝組織脂代謝相關(guān)基因ACC-1、LXR、ACSL、ChREBP表達(dá)下降。
　　(7)β-半乳糖苷酶(β-Gal)染色提示木瓜30%醇洗脫液可以降低模型小鼠肝細(xì)胞β-Gal陽性細(xì)胞數(shù)量；木瓜30%醇洗脫液可以降低模型小鼠肝組織衰老相關(guān)基因P21、P53表達(dá)；降低其TLR-4及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)Grp78、CHO