臍血單個核細胞擴增前后的骨髓基質(zhì)植入能力及條件研究.pdf

1、目的:模擬體內(nèi)造血微環(huán)境,植入體外擴增和未擴增的臍血干/祖細胞,探討臍血干/祖細胞和擴增后祖細胞的植入能力,改善植入條件,提高移植效率,最終達到造血重建和免疫重建,為臍血干細胞移植成功應用于成年患者提供理論和實驗依據(jù).方法:應用體外細胞液體培養(yǎng)、混合集落培養(yǎng)(CFU-mix)及鑒定、細胞化學染色、流式細胞儀(FACS Calibur)分析檢測等技術進行實驗.①應用密度梯度離心法獲得臍血的單個核細胞(mononuelear cell,MN

2、C),選用細胞因子組合液體培養(yǎng)體系對其進行體外擴增,預鋪設骨髓基質(zhì)細胞滋養(yǎng)層(bone marrow stromal cell,BMSC),利用鋪展貼壁實驗研究其植入能力.②擴增前后臍血干/祖細胞植入能力研究的實驗分組:A組為擴增后細胞植入組(祖細胞);B組為未擴增細胞植入祖(干/祖細胞);C組為混合細胞植入組(1/3A組+2/3B組).③改善植入條件研究的實驗分組如下:A組為混合細胞組接種于臍血基質(zhì)細胞滋養(yǎng)層;B組為混合細胞組接種于成

3、人正常骨髓基質(zhì)細胞滋養(yǎng)層;C組為混合細胞組接種于急性白血病完全緩解骨髓基質(zhì)細胞滋養(yǎng)層;D組為混合細胞組接種于經(jīng)堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)處理的急性白血病完全緩解骨髓基質(zhì)細胞滋養(yǎng)層.結(jié)論:①不同密度梯度比重的淋巴細胞分離液分離臍血造血干/祖細胞具有不同效果,1.064g/L Ficoll-hypaque所分離的臍血造血細胞中CD34<'+>含量高,體外有較強的增殖能力.