裂殖酵母中人DJ-1同源蛋白亞細胞定位及SpDJ-1在脅迫反應中作用的研究.pdf

1、人DJ-1(HsDJ-1)是一種與早期帕金森疾病和很多癌癥相關(guān)的蛋白。粟酒裂殖酵母中有1個與其同源性很高的SpDJ-1蛋白和5個同源性較遠的Hsp31蛋白(Hsp3101，Hsp3102，Hsp3103，Hsp3104，Hsp3105)。已有報道，DJ-1及其同源蛋白在很多的物種中參與抗氧化刺激，但在裂殖酵母中DJ-1蛋白是否參與抗氧化刺激并未報道且這種保護機制并不清楚。
　　本論文主要研究粟酒裂殖酵母細胞中SpDJ-1和Hsp3

2、101-3105蛋白在不同強度啟動子調(diào)控下的蛋白亞細胞定位、蛋白在不同生長時期的表達水平以及SpDJ-1蛋白抗氧化刺激的作用，并對其這種作用機制做出初步的解釋。
　　我們首先通過GFP熒光標記研究發(fā)現(xiàn)，在中等強度nmt1啟動子調(diào)控下，SpDJ-1、Hsp3101、Hsp3105既存在于細胞核又存在于細胞質(zhì)中，Hsp3102僅存在于細胞質(zhì)中，Hsp3104僅存在于細胞質(zhì)中且呈胞質(zhì)小點狀，而在基因自身啟動子調(diào)控下，SpDJ-1和Hsp

3、3101既定位于細胞核中也定位于細胞質(zhì)中，Hsp3102只存在于細胞質(zhì)中，結(jié)果表明這些同源蛋白定位于不同的亞細胞器中，預示著功能或者功能發(fā)揮位置的不一;繼而Western b lot檢測發(fā)現(xiàn)SpDJ-1、Hsp3101、Hsp3102、Hsp3105蛋白對數(shù)期至穩(wěn)態(tài)期有一個明顯的遞增趨勢，而且在穩(wěn)態(tài)期趨于平穩(wěn)，說明蛋白主要是在穩(wěn)態(tài)期表達并積累，預示著蛋白可能是在穩(wěn)態(tài)期發(fā)揮作用。最后我們通過檢測敲除SpDJ-1基因和高表達SpDJ-1基因