DJ-1在胰腺癌轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：①研究血清中DJ-1水平以及與胰腺癌臨床特征、預(yù)后的關(guān)系。②研究DJ-1在胰腺癌患者組織中表達(dá)及與胰腺癌臨床病例類型、分期、預(yù)后的關(guān)系。③研究DJ-1在胰腺癌轉(zhuǎn)移過程中的生物學(xué)意義，及影響胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。
　　 方法：①在47例胰腺癌患者與43例慢性胰腺炎和40例正常人的血清中，用ELISA檢測(cè)DJ-1的水平，并與臨床資料結(jié)合，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。②用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)DJ-1在第一組76對(duì)胰腺癌及癌旁組織的組織芯

2、片中的表達(dá)，并分析在另86例胰腺癌的組織芯片中的表達(dá)，以及DJ-1與臨床各項(xiàng)因素，預(yù)后的關(guān)系。③采用shRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞技術(shù)，獲得DJ-1敲低的細(xì)胞株，通過轉(zhuǎn)染耐shRNA的DJ-1突變載體恢復(fù)DJ-1表達(dá)。在上述人為下調(diào)和上調(diào)DJ-1變化的基礎(chǔ)上檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞的生物學(xué)功能和信號(hào)通路變化：Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲、遷移能力，MMT法測(cè)增殖實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期；Western blot檢測(cè)uPA系統(tǒng)相關(guān)蛋白水平(

3、uPA、PAI-1、uPAR)、ERK1/2信號(hào)通路變化，AKT信號(hào)通路變化；uPA活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)檢測(cè)uPA活性變化，明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MMP2，9的活性變化；共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞骨架；裸鼠體內(nèi)尾靜脈肺轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)。最后以U0126抑制ERK1/2通路，檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞是否發(fā)生與干擾DJ-1類似的效果。
　　 結(jié)果：①血清DJ-1水平在胰腺癌患者中較對(duì)照組升高，且提示不良預(yù)后。DJ-1血清臨床診斷性能(ROC)曲線下面積(AUC)優(yōu)于與胰

4、腺癌傳統(tǒng)標(biāo)志物CA19-9，聯(lián)合CA19-9診斷胰腺癌的敏感性高于單用CA19-9。②在該76例胰腺痛組織中，DJ-1呈高表達(dá)的例數(shù)占86％(66/76)，而在癌旁組織中呈DJ-1高表達(dá)的組織占34.2％(26/76)；DJ-1呈高、中低表達(dá)的胰腺癌組織分別占68.5％(50/76)和31.5％(26/76)，而痛旁組織為34.2％(26/76)和65.8(50/76)(P<0.05)。而在另一組有詳細(xì)臨床資料的87例胰腺癌組織中，89

5、.6％(78/87)的胰腺痛組織樣本呈高表達(dá)，與前述結(jié)果相似，DJ-1在胰腺痛痛組織中的水平與胰腺痛浸潤(rùn)深度正相關(guān)，且高表達(dá)DJ-1提示不良預(yù)后。③經(jīng)Western blot驗(yàn)證了DJ-1-shRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的BxPC-3和SW1990細(xì)胞株較對(duì)照細(xì)胞DJ-1水平明顯減低，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染耐shRNA的DJ-1表達(dá)可以恢復(fù)被shRNA干擾后的DJ-1表達(dá)。在此基礎(chǔ)上我們結(jié)果顯示：干擾DJ-1使胰腺癌細(xì)胞侵襲遷移能力減低、細(xì)胞骨架破壞，uPA表達(dá)

6、以及活性減低、MMP2活性和表達(dá)減低、K-RAS活性減低、ERK1/2和SRC磷酸化減低、這些均可被恢復(fù)DJ-1表達(dá)所逆轉(zhuǎn)。干擾DJ-1不影響細(xì)胞活力、增殖、細(xì)胞周期分布，不影響AKT磷酸化，不改變uPA系統(tǒng)其他蛋白PAI-1/uPAR表達(dá)。在裸鼠尾靜脈注射BxPC-3的shRNA DJ-1和shRNANC穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，2月后解剖小鼠，發(fā)現(xiàn)shRNA DJ-1組肺轉(zhuǎn)移灶明顯較shRNA NC組減少并縮小。最后U0126能減低胰腺癌細(xì)胞uP