DJ-1在胰腺癌轉移中的作用機制研究.pdf

1、目的：①研究血清中DJ-1水平以及與胰腺癌臨床特征、預后的關系。②研究DJ-1在胰腺癌患者組織中表達及與胰腺癌臨床病例類型、分期、預后的關系。③研究DJ-1在胰腺癌轉移過程中的生物學意義，及影響胰腺癌侵襲轉移的分子機制。
　　 方法：①在47例胰腺癌患者與43例慢性胰腺炎和40例正常人的血清中，用ELISA檢測DJ-1的水平，并與臨床資料結合，進行統(tǒng)計分析。②用免疫組織化學染色法檢測DJ-1在第一組76對胰腺癌及癌旁組織的組織芯

2、片中的表達，并分析在另86例胰腺癌的組織芯片中的表達，以及DJ-1與臨床各項因素，預后的關系。③采用shRNA穩(wěn)定轉染胰腺癌細胞技術，獲得DJ-1敲低的細胞株，通過轉染耐shRNA的DJ-1突變載體恢復DJ-1表達。在上述人為下調和上調DJ-1變化的基礎上檢測胰腺癌細胞的生物學功能和信號通路變化：Transwell小室檢測細胞侵襲、遷移能力，MMT法測增殖實驗、流式細胞術檢測細胞周期；Western blot檢測uPA系統(tǒng)相關蛋白水平(

3、uPA、PAI-1、uPAR)、ERK1/2信號通路變化，AKT信號通路變化；uPA活性測定實驗檢測uPA活性變化，明膠酶譜實驗檢測MMP2，9的活性變化；共聚焦顯微鏡觀察細胞骨架；裸鼠體內尾靜脈肺轉移實驗。最后以U0126抑制ERK1/2通路，檢測胰腺癌細胞是否發(fā)生與干擾DJ-1類似的效果。
　　 結果：①血清DJ-1水平在胰腺癌患者中較對照組升高，且提示不良預后。DJ-1血清臨床診斷性能(ROC)曲線下面積(AUC)優(yōu)于與胰

4、腺癌傳統(tǒng)標志物CA19-9，聯(lián)合CA19-9診斷胰腺癌的敏感性高于單用CA19-9。②在該76例胰腺痛組織中，DJ-1呈高表達的例數(shù)占86％(66/76)，而在癌旁組織中呈DJ-1高表達的組織占34.2％(26/76)；DJ-1呈高、中低表達的胰腺癌組織分別占68.5％(50/76)和31.5％(26/76)，而痛旁組織為34.2％(26/76)和65.8(50/76)(P<0.05)。而在另一組有詳細臨床資料的87例胰腺癌組織中，89

5、.6％(78/87)的胰腺痛組織樣本呈高表達，與前述結果相似，DJ-1在胰腺痛痛組織中的水平與胰腺痛浸潤深度正相關，且高表達DJ-1提示不良預后。③經Western blot驗證了DJ-1-shRNA穩(wěn)定轉染的BxPC-3和SW1990細胞株較對照細胞DJ-1水平明顯減低，瞬時轉染耐shRNA的DJ-1表達可以恢復被shRNA干擾后的DJ-1表達。在此基礎上我們結果顯示：干擾DJ-1使胰腺癌細胞侵襲遷移能力減低、細胞骨架破壞，uPA表達

6、以及活性減低、MMP2活性和表達減低、K-RAS活性減低、ERK1/2和SRC磷酸化減低、這些均可被恢復DJ-1表達所逆轉。干擾DJ-1不影響細胞活力、增殖、細胞周期分布，不影響AKT磷酸化，不改變uPA系統(tǒng)其他蛋白PAI-1/uPAR表達。在裸鼠尾靜脈注射BxPC-3的shRNA DJ-1和shRNANC穩(wěn)轉細胞株，2月后解剖小鼠，發(fā)現(xiàn)shRNA DJ-1組肺轉移灶明顯較shRNA NC組減少并縮小。最后U0126能減低胰腺癌細胞uP