DJ-1在胰腺癌轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制研究.pdf_第1頁
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1、目的:①研究血清中DJ-1水平以及與胰腺癌臨床特征、預(yù)后的關(guān)系。②研究DJ-1在胰腺癌患者組織中表達(dá)及與胰腺癌臨床病例類型、分期、預(yù)后的關(guān)系。③研究DJ-1在胰腺癌轉(zhuǎn)移過程中的生物學(xué)意義,及影響胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。
   方法:①在47例胰腺癌患者與43例慢性胰腺炎和40例正常人的血清中,用ELISA檢測(cè)DJ-1的水平,并與臨床資料結(jié)合,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。②用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)DJ-1在第一組76對(duì)胰腺癌及癌旁組織的組織芯

2、片中的表達(dá),并分析在另86例胰腺癌的組織芯片中的表達(dá),以及DJ-1與臨床各項(xiàng)因素,預(yù)后的關(guān)系。③采用shRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞技術(shù),獲得DJ-1敲低的細(xì)胞株,通過轉(zhuǎn)染耐shRNA的DJ-1突變載體恢復(fù)DJ-1表達(dá)。在上述人為下調(diào)和上調(diào)DJ-1變化的基礎(chǔ)上檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞的生物學(xué)功能和信號(hào)通路變化:Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲、遷移能力,MMT法測(cè)增殖實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期;Western blot檢測(cè)uPA系統(tǒng)相關(guān)蛋白水平(

3、uPA、PAI-1、uPAR)、ERK1/2信號(hào)通路變化,AKT信號(hào)通路變化;uPA活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)檢測(cè)uPA活性變化,明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MMP2,9的活性變化;共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞骨架;裸鼠體內(nèi)尾靜脈肺轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)。最后以U0126抑制ERK1/2通路,檢測(cè)胰腺癌細(xì)胞是否發(fā)生與干擾DJ-1類似的效果。
   結(jié)果:①血清DJ-1水平在胰腺癌患者中較對(duì)照組升高,且提示不良預(yù)后。DJ-1血清臨床診斷性能(ROC)曲線下面積(AUC)優(yōu)于與胰

4、腺癌傳統(tǒng)標(biāo)志物CA19-9,聯(lián)合CA19-9診斷胰腺癌的敏感性高于單用CA19-9。②在該76例胰腺痛組織中,DJ-1呈高表達(dá)的例數(shù)占86%(66/76),而在癌旁組織中呈DJ-1高表達(dá)的組織占34.2%(26/76);DJ-1呈高、中低表達(dá)的胰腺癌組織分別占68.5%(50/76)和31.5%(26/76),而痛旁組織為34.2%(26/76)和65.8(50/76)(P<0.05)。而在另一組有詳細(xì)臨床資料的87例胰腺癌組織中,89

5、.6%(78/87)的胰腺痛組織樣本呈高表達(dá),與前述結(jié)果相似,DJ-1在胰腺痛痛組織中的水平與胰腺痛浸潤(rùn)深度正相關(guān),且高表達(dá)DJ-1提示不良預(yù)后。③經(jīng)Western blot驗(yàn)證了DJ-1-shRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的BxPC-3和SW1990細(xì)胞株較對(duì)照細(xì)胞DJ-1水平明顯減低,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染耐shRNA的DJ-1表達(dá)可以恢復(fù)被shRNA干擾后的DJ-1表達(dá)。在此基礎(chǔ)上我們結(jié)果顯示:干擾DJ-1使胰腺癌細(xì)胞侵襲遷移能力減低、細(xì)胞骨架破壞,uPA表達(dá)

6、以及活性減低、MMP2活性和表達(dá)減低、K-RAS活性減低、ERK1/2和SRC磷酸化減低、這些均可被恢復(fù)DJ-1表達(dá)所逆轉(zhuǎn)。干擾DJ-1不影響細(xì)胞活力、增殖、細(xì)胞周期分布,不影響AKT磷酸化,不改變uPA系統(tǒng)其他蛋白PAI-1/uPAR表達(dá)。在裸鼠尾靜脈注射BxPC-3的shRNA DJ-1和shRNANC穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,2月后解剖小鼠,發(fā)現(xiàn)shRNA DJ-1組肺轉(zhuǎn)移灶明顯較shRNA NC組減少并縮小。最后U0126能減低胰腺癌細(xì)胞uP

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