壓力對體外培養(yǎng)RGCs的影響及燈盞細(xì)辛對壓力誘導(dǎo)RGCs損傷的保護(hù)作用.pdf

1、研究背景：青光眼是一組以視神經(jīng)萎縮和視野缺損為共同特征的疾病，它是僅次于白內(nèi)障的全球第二位致盲性眼病。除眼壓以外還有眾多的因素與視神經(jīng)損傷有關(guān)。燈盞細(xì)辛是一種中草藥，能夠改善微循環(huán)，保護(hù)青光眼視神經(jīng)。實驗研究顯示其能夠?qū)Υ笫髮嶒炐郧喙庋垡暽窠?jīng)起保護(hù)作用，但其具體的機制仍不十分清楚。本實驗通過建立體外高壓培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞模型，用燈盞細(xì)辛提取物進(jìn)行保護(hù)性治療，探討其可能的作用機制。
　　目的：1建立體外高壓培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞模型

2、并觀察壓力對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的影響；2觀察燈盞細(xì)辛提取物對體外培養(yǎng)鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)凋亡的影響，探討其神經(jīng)保護(hù)作用的機制，在細(xì)胞分子水平進(jìn)一步為燈盞細(xì)辛提取物在眼科視網(wǎng)膜領(lǐng)域的保護(hù)作用提供理論依據(jù)。
　　方法：l建立大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(Retinal Ganglion Cells,RGCs)體外混合培養(yǎng)模型。2在混合培養(yǎng)24小時后的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中加入不同濃度的燈盞細(xì)辛提取物、神經(jīng)生長因子(NGF)、培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24小時，用噻唑蘭比

3、色法(MTT法)，測定每組的光密度值(OD值)。3在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)培養(yǎng)24小時后，在培養(yǎng)板中加入不同濃度燈盞細(xì)辛提取物、神經(jīng)生長因子、培養(yǎng)液，并按照實驗設(shè)計將實驗組和模型組密閉加壓至80mmHg持續(xù)4小時，繼續(xù)培養(yǎng)24小時，用Elisa法測量培養(yǎng)液中的谷氨酸和γ-氨基丁酸含量。
　　結(jié)果：1混合培養(yǎng)的RGCs最長可存活2-3周。2壓力能促進(jìn)RGCs的凋亡。3在RGCs培養(yǎng)中，1mg/ml、0.1mg/ml濃度的燈盞細(xì)

4、辛、神經(jīng)生長因子組的OD值高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05)；1mg/ml燈盞細(xì)辛組OD值高于0.1mg/ml濃度的燈盞細(xì)辛和神經(jīng)生長因子組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05)。4在RGCs以80mmHg培養(yǎng)4h時，模型組上清液中谷氨酸含量與空白對照組相比較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05)，模型組上清液中γ-氨基丁酸含量較空白對照組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05)；燈盞細(xì)辛組上清液中谷氨酸含量低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義