黑色素瘤缺乏因子2在慢性乙型肝炎及其相關(guān)性腎小球腎炎中作用機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：
　　HBV感染是個全球性問題，由于HBV感染所導(dǎo)致的肝硬化，肝衰竭甚至肝癌等臨床結(jié)局嚴(yán)重的威脅人類的健康。同時，HBV的感染也可導(dǎo)致許多肝外疾病的發(fā)生，HBV相關(guān)性腎小球腎炎即是常見的一種肝外HBV感染相關(guān)疾病。目前，關(guān)于兩種疾病的發(fā)病機(jī)制均不明確，大多數(shù)觀點認(rèn)為與免疫反應(yīng)相關(guān)。黑色素缺乏因子2(AIM2)屬于HIN-200蛋白家族，其主要存在于細(xì)胞漿中，AIM2可被胞漿內(nèi)dsDNA所識別并激活，并結(jié)合中間蛋白ASC形成炎

2、性復(fù)合體，進(jìn)一步激活caspase-1途徑，誘導(dǎo)IL-1β、IL-18等炎性因子的成熟和釋放，最終導(dǎo)致炎癥的發(fā)生，在機(jī)體的固有免疫反應(yīng)誘發(fā)的炎癥中扮演重要作用。在慢性乙型肝炎中，乙肝病毒在復(fù)制的過程，首先位于肝細(xì)胞核內(nèi)的CCC-DNA為乙肝病毒復(fù)制的終模板，由其為模板合成負(fù)鏈DNA，再由負(fù)鏈DNA為模板合成正鏈DNA，然后形成ds-DNA，在由胞內(nèi)向胞外轉(zhuǎn)移的過程中，利用胞內(nèi)蛋白完成病毒的裝配而釋放。那么，在轉(zhuǎn)運(yùn)的過程中ds-DNA便有

3、機(jī)會被胞漿內(nèi)的AIM2所識別，形成炎性復(fù)合體從而誘發(fā)肝臟炎癥;同樣，在HBV-GN中，既往已有研究報道電鏡檢測可以發(fā)現(xiàn)腎組織固有細(xì)胞內(nèi)存在有乙肝病毒樣顆粒及HBV-DNA的復(fù)制，那么腎臟固有細(xì)胞胞漿中的AIM2也有機(jī)會識別HBV-DNA并被激活，通過caspase-1途徑，釋放IL-1β、IL-18炎性因子，從而導(dǎo)致腎臟炎癥的發(fā)生。為了驗證這一設(shè)想，進(jìn)行了此項研究，通過檢測肝臟及腎臟內(nèi)AIM2的表達(dá)及與caspase-1，IL-1β及I

4、L-18表達(dá)的關(guān)系，探討HBV與AIM2的激活在CHB、HBV-GN中可能的致病機(jī)制，為這一疾病的發(fā)病機(jī)制和治療提供新的思路和研究方法。
　　方法：
　　研究通過組織免疫組化實驗測定慢性乙型肝炎組織及HBV-GN的腎組織中AIM2水平，及其與caspase-1，IL-1β、IL-18等炎性因子表達(dá)水平以及肝細(xì)胞，腎臟炎癥程度的關(guān)系。
　　共計70例慢性肝炎的患者及79例慢性腎小球腎炎的患者納入到本項研究，其中在慢性肝炎

5、患者中，慢性乙型肝炎47例為實驗組，慢性丙肝患者23例為對照組;慢性腎小球腎炎的患者中，慢性乙肝相關(guān)性腎炎(HBV-GN)病人54例作為實驗組，慢性腎小球腎炎(CGN)患者25例作為對照組。以上所有的病人均根據(jù)研究的要求行肝臟穿刺或腎臟穿刺取得肝或腎組織標(biāo)本制備石蠟包埋切片。應(yīng)用免疫組化法半定量測定患者肝、腎穿標(biāo)本中AIM2、Caspase-1、IL-18、IL-1β的表達(dá)，同時分析AIM2的表達(dá)水平與臨床資料的相關(guān)性。本研究結(jié)果運(yùn)用S

6、PSS17.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)處理，兩組間AIM2的表達(dá)及臨床資料的的關(guān)系采用x2檢驗和Fisher精確概率檢驗，多個樣本間的單因素比較采用單因素方差分析，相關(guān)性分析采用Spearman's檢驗。所有結(jié)果的分析均以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、在慢性乙型肝炎組織中，AIM2的表達(dá)主要定位于肝細(xì)胞胞漿內(nèi);
　　2、AIM2在慢乙肝組織內(nèi)的表達(dá)明顯高于其在慢丙肝患者肝組織中的表達(dá)(89.4％vs.

7、8.7％，p＜0.00)，兩者具有統(tǒng)計學(xué)意義;
　　3、慢乙肝患者肝組織內(nèi)AIM2的表達(dá)與年齡(p=0.178)、性別(p=0.148)、e抗原的狀態(tài)（p=0.825）無關(guān);
　　4、AIM2的表達(dá)與ALT的水平具有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.03)，而與AST的水平無關(guān)(p=0.378);
　　5、在HBV高載量組(HBV-DNA≥1×105copies/ml)，AIM2的表達(dá)高于其在HBV低載量組(HBV-DNA＜1×10

8、5copies/ml)的表達(dá)(p＜0.01)，兩者具有統(tǒng)計學(xué)差異;
　　6、AIM2的表達(dá)與肝臟炎癥分級存在高度的相關(guān)性（p=0.007），而和纖維化分級則無明顯相關(guān)（p=0.101）;
　　7、慢乙肝肝組織內(nèi)AIM2的表達(dá)與caspase-1(rs=0.738，p＜0.01)，IL-1β(rs=0.527，p＜0.01)及IL-18(rs=0.642，p＜0.01)的表達(dá)呈正相關(guān);
　　8、AIM2在HBV-GN腎組

9、織中主要定位于腎小球系膜細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi);
　　9、在HBV-GN中，AIM2的陽性表達(dá)率為81.4％，明顯高于其在CGN中的表達(dá)(4.0％)，兩者具有統(tǒng)計學(xué)差異(81.4％vs.4.0％，p＜0.01);
　　10、AIM2的表達(dá)與血清e抗原的狀態(tài)無關(guān)(p=0.614);同時與腎組織中HBV相關(guān)抗原的沉積無關(guān)(p=0.511);
　　11、HBV-GN中高病毒載量組中AIM2的表達(dá)相比較于低病毒載量組有統(tǒng)計學(xué)差異(p

10、＜0.05);
　　12、不同病理類型的HBV-GN中AIM2的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異(p=0.940);
　　13、HBV-GN腎組織中AIM2的表達(dá)分別與caspase-1的表達(dá)(rs=0.444，p＜0.01)以及IL-1β的表達(dá)(rs=0.379，p＜0.01)呈正相關(guān);而caspase-1的表達(dá)亦與IL-1β的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.515，p＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　AIM2可能通過識別并結(jié)合HBV-