黑色素瘤缺乏因子2在慢性乙型肝炎及其相關性腎小球腎炎中作用機制的初步研究.pdf

1、目的：
　　HBV感染是個全球性問題，由于HBV感染所導致的肝硬化，肝衰竭甚至肝癌等臨床結局嚴重的威脅人類的健康。同時，HBV的感染也可導致許多肝外疾病的發(fā)生，HBV相關性腎小球腎炎即是常見的一種肝外HBV感染相關疾病。目前，關于兩種疾病的發(fā)病機制均不明確，大多數(shù)觀點認為與免疫反應相關。黑色素缺乏因子2(AIM2)屬于HIN-200蛋白家族，其主要存在于細胞漿中，AIM2可被胞漿內(nèi)dsDNA所識別并激活，并結合中間蛋白ASC形成炎

2、性復合體，進一步激活caspase-1途徑，誘導IL-1β、IL-18等炎性因子的成熟和釋放，最終導致炎癥的發(fā)生，在機體的固有免疫反應誘發(fā)的炎癥中扮演重要作用。在慢性乙型肝炎中，乙肝病毒在復制的過程，首先位于肝細胞核內(nèi)的CCC-DNA為乙肝病毒復制的終模板，由其為模板合成負鏈DNA，再由負鏈DNA為模板合成正鏈DNA，然后形成ds-DNA，在由胞內(nèi)向胞外轉(zhuǎn)移的過程中，利用胞內(nèi)蛋白完成病毒的裝配而釋放。那么，在轉(zhuǎn)運的過程中ds-DNA便有

3、機會被胞漿內(nèi)的AIM2所識別，形成炎性復合體從而誘發(fā)肝臟炎癥;同樣，在HBV-GN中，既往已有研究報道電鏡檢測可以發(fā)現(xiàn)腎組織固有細胞內(nèi)存在有乙肝病毒樣顆粒及HBV-DNA的復制，那么腎臟固有細胞胞漿中的AIM2也有機會識別HBV-DNA并被激活，通過caspase-1途徑，釋放IL-1β、IL-18炎性因子，從而導致腎臟炎癥的發(fā)生。為了驗證這一設想，進行了此項研究，通過檢測肝臟及腎臟內(nèi)AIM2的表達及與caspase-1，IL-1β及I

4、L-18表達的關系，探討HBV與AIM2的激活在CHB、HBV-GN中可能的致病機制，為這一疾病的發(fā)病機制和治療提供新的思路和研究方法。
　　方法：
　　研究通過組織免疫組化實驗測定慢性乙型肝炎組織及HBV-GN的腎組織中AIM2水平，及其與caspase-1，IL-1β、IL-18等炎性因子表達水平以及肝細胞，腎臟炎癥程度的關系。
　　共計70例慢性肝炎的患者及79例慢性腎小球腎炎的患者納入到本項研究，其中在慢性肝炎

5、患者中，慢性乙型肝炎47例為實驗組，慢性丙肝患者23例為對照組;慢性腎小球腎炎的患者中，慢性乙肝相關性腎炎(HBV-GN)病人54例作為實驗組，慢性腎小球腎炎(CGN)患者25例作為對照組。以上所有的病人均根據(jù)研究的要求行肝臟穿刺或腎臟穿刺取得肝或腎組織標本制備石蠟包埋切片。應用免疫組化法半定量測定患者肝、腎穿標本中AIM2、Caspase-1、IL-18、IL-1β的表達，同時分析AIM2的表達水平與臨床資料的相關性。本研究結果運用S

6、PSS17.0軟件包進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學處理，兩組間AIM2的表達及臨床資料的的關系采用x2檢驗和Fisher精確概率檢驗，多個樣本間的單因素比較采用單因素方差分析，相關性分析采用Spearman's檢驗。所有結果的分析均以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1、在慢性乙型肝炎組織中，AIM2的表達主要定位于肝細胞胞漿內(nèi);
　　2、AIM2在慢乙肝組織內(nèi)的表達明顯高于其在慢丙肝患者肝組織中的表達(89.4％vs.

7、8.7％，p＜0.00)，兩者具有統(tǒng)計學意義;
　　3、慢乙肝患者肝組織內(nèi)AIM2的表達與年齡(p=0.178)、性別(p=0.148)、e抗原的狀態(tài)（p=0.825）無關;
　　4、AIM2的表達與ALT的水平具有統(tǒng)計學意義(p=0.03)，而與AST的水平無關(p=0.378);
　　5、在HBV高載量組(HBV-DNA≥1×105copies/ml)，AIM2的表達高于其在HBV低載量組(HBV-DNA＜1×10

8、5copies/ml)的表達(p＜0.01)，兩者具有統(tǒng)計學差異;
　　6、AIM2的表達與肝臟炎癥分級存在高度的相關性（p=0.007），而和纖維化分級則無明顯相關（p=0.101）;
　　7、慢乙肝肝組織內(nèi)AIM2的表達與caspase-1(rs=0.738，p＜0.01)，IL-1β(rs=0.527，p＜0.01)及IL-18(rs=0.642，p＜0.01)的表達呈正相關;
　　8、AIM2在HBV-GN腎組

9、織中主要定位于腎小球系膜細胞及內(nèi)皮細胞內(nèi);
　　9、在HBV-GN中，AIM2的陽性表達率為81.4％，明顯高于其在CGN中的表達(4.0％)，兩者具有統(tǒng)計學差異(81.4％vs.4.0％，p＜0.01);
　　10、AIM2的表達與血清e抗原的狀態(tài)無關(p=0.614);同時與腎組織中HBV相關抗原的沉積無關(p=0.511);
　　11、HBV-GN中高病毒載量組中AIM2的表達相比較于低病毒載量組有統(tǒng)計學差異(p

10、＜0.05);
　　12、不同病理類型的HBV-GN中AIM2的表達無統(tǒng)計學差異(p=0.940);
　　13、HBV-GN腎組織中AIM2的表達分別與caspase-1的表達(rs=0.444，p＜0.01)以及IL-1β的表達(rs=0.379，p＜0.01)呈正相關;而caspase-1的表達亦與IL-1β的表達呈正相關(rs=0.515，p＜0.01)。
　　結論：
　　AIM2可能通過識別并結合HBV-