載VEGF和bFGF納米粒子共同修飾的膀胱無細胞基質誘導膀胱再生抑制攣縮的研究.pdf

1、一些先天性畸形及后天膀胱疾病，如神經(jīng)源性膀胱、膀胱外翻、后尿道瓣膜等，最終往往需要進行膀胱擴大術。目前臨床上治療的金標準是胃腸膀胱成形術，然而利用胃腸組織替代膀胱存在一些潛在的并發(fā)癥，如結石、感染、代謝異常、繼發(fā)腫瘤等。膀胱無細胞基質具有良好的組織相容性，是理想的替代材料。然而單純利用膀胱無細胞基質誘導膀胱再生存在明顯的移植物攣縮現(xiàn)象。早期快速地形成成熟的血管網(wǎng)絡對移植物組織化并且維持再生組織細胞長期存活就顯得格外重要。目前的研究通過再

2、水化、透明質酸、化學偶聯(lián)等方式將外源性生長因子導入無細胞基質中，通過釋放的生長因子促進再生組織血管化。但是導入的生長因子只能在有限的時間（2-3周）內(nèi)持續(xù)釋放或發(fā)揮作用，4周后再無生長因子釋放，凸顯了誘導組織再生能力不足的問題。載藥納米技術是近幾年新興的藥物緩釋技術。將載藥的納米粒子與膀胱無細胞基質復合，有望解決生長因子在體內(nèi)長效緩釋的問題，促進膀胱再生，達到抑制移植物攣縮的目的。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴采用物理、化學及酶消化

3、法，制備了豬膀胱無細胞基質。經(jīng)過脫細胞處理后，數(shù)碼相機拍照，進行大體標本觀察。在掃描電鏡下，觀察無細胞基質超微結構，評價脫細胞程度及有無細胞殘留。結果表明，本研究制備的無細胞基質，呈白色半透明狀，表面光滑，具有一定的彈性和韌性，掃描電鏡未發(fā)現(xiàn)細胞及碎片殘留，可應用于膀胱替代研究。⑵通過經(jīng)典的雙乳化旋蒸技術成功制備了分別包封VEGF和bFGF的PLGA納米粒子。通過激光粒度儀分析載藥納米粒子粒徑分布，掃描電鏡觀察粒徑大小及形貌特點。利用溫

4、敏凝膠將載藥納米粒子嵌入膀胱無細胞基質中，考察VEGF和bFGF在體外的緩釋特性。結果表明，載VEGF和bFGF的納米粒子在體外2個月內(nèi)持續(xù)釋放VEGF和bFGF達到60-70％，實現(xiàn)了長效緩釋的目的。⑶通過乳酸脫氫酶細胞毒性實驗評價載蛋白納米粒子對人臍靜脈內(nèi)皮細胞的毒性，結果證明納米粒子對細胞無明顯的毒性作用。通過CCK-8細胞增殖實驗測定經(jīng)載蛋白納米粒子處理后的細胞活力，結果證明在細胞培養(yǎng)24h、48h和72h后，載蛋白納米粒子組（

5、VEGF+bFGF納米粒子組、VEGF納米粒子組、bFGF納米粒子組）比非加蛋白組（空白納米粒子組、單純BAM組）表現(xiàn)較高的細胞活力。根據(jù)western blot結果，VEGF+bFGF納米粒子組的PCNA表達量顯著高于其他各組。體外細胞實驗證明，載蛋白納米緩釋體系無毒性，長效緩釋的生長因子具有生物學活性。⑷長期緩釋VEGF和bFGF的膀胱無細胞基質大面積（2cm×3cm）替代兔膀胱，評價術后4周和12周時膀胱的再生情況，測定移植物攣縮