乳酸克魯維酵母Cu，Zn-SOD基因在釀酒酵母中的表達.pdf

1、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase； EC1.15.1.1；SOD)廣泛存在于生物體內(nèi)。按金屬輔基的不同可分為Cu，Zn-SOD，Mn-SOD與Fe-SOD。Cu，Zn-SOD主要存在于真核生物的細胞質和過氧化物酶中，同時它也存在于植物的葉綠體中。在哺乳動物體內(nèi)存在兩種類型的Cu，Zn-SOD，一種是細胞內(nèi)存在形式，叫細胞內(nèi)Cu，Zn-SOD(簡稱Cu，Zn-SOD)，另一種是細胞外存在形式，叫細胞外Cu，Zn-S

2、OD(簡稱EC-SOD)。SOD是機體內(nèi)唯一以超氧陰離子自由基(O2-·)為底物的酶，它能專一地催化O2-·的歧化反應，生成過氧化氫和氧氣，在防止氧化脅迫方面發(fā)揮重要作用，能有效的抵御氧自由基和其他氧化物，對機體防御氧化損傷起著十分重要的作用。 本工作主要對SOD在抵抗外界脅迫下功能進行研究。通過PCR擴增技術從乳酸克魯維酵母基因組中得到了465bp的Cu，Zn-SOD結構基因，從pUCm-T載體上獲得了1214bp帶有PGK1

3、啟動子和AT終止子的GFP基因，并把它們構建到釀酒酵母表達載體YEplac195-PSGA中。通過菌落PCR驗證和熒光檢測證明了所構建載體能在釀酒酵母中成功表達；通過百草枯壓力篩選和鄰苯三酚酶活測定法證明了乳酸克魯維酵母SOD基因已經(jīng)在釀酒酵母中表達并且提高了釀酒酵母在氧化脅迫方面的耐受力；也證明提高SOD的表達量只能在一定范圍內(nèi)增加菌體在氧脅迫方面的耐受力。 通過Sph I/EcoR I雙酶切YEplac195-PSGA得到了