MicroRNA-219在癲癇發(fā)病中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:通過(guò)海人酸、匹羅卡品誘導(dǎo)C57BL/6、ICR小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)發(fā)作，制造人類顳葉癲癇動(dòng)物模型，探討microRNA-219在癲癇發(fā)病中的功能通路及調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的動(dòng)態(tài)變化，為癲癇的診斷提供新的依據(jù)，為抗癇藥物研制提示新的作用靶點(diǎn)。
　　方法:用成年雄性C57BL/6、ICR小鼠為研究對(duì)象，側(cè)腦室注射海人酸(Kainicacid，KA)或腹腔注射匹羅卡品誘發(fā)小鼠癲癇發(fā)作，建立小鼠癲癇動(dòng)物模型。24小時(shí)后檢測(cè)小鼠皮質(zhì)腦電圖改變并運(yùn)用熒

2、光定量PCR方法檢測(cè)小鼠海馬和皮質(zhì)中microRNA-219表達(dá)變化情況，同時(shí)運(yùn)用蛋白免疫印跡方法檢測(cè)小鼠海馬中CaMKⅡγ、NMDAR1蛋白表達(dá)變化情況。收集8例顳葉癲癇患者和6例對(duì)照組患者的腦脊液，運(yùn)用熒光定量PCR方法檢測(cè)腦脊液中microRNA-219表達(dá)變化情況。進(jìn)一步給予小鼠側(cè)腦室注射microRNA-219的特異性拮抗劑（antagomir-219）、特異性激動(dòng)劑（agomir-219）、陰性對(duì)照劑.(antagomir-

3、NC、agomir-NC)以及腹腔注射NMDA受體的非競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑MK-801，觀察小鼠行為學(xué)改變，同時(shí)檢測(cè)小鼠皮質(zhì)腦電圖改變及海馬中microRNA-219、CaMKⅡγ、NMDAR1表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果:1.海人酸或匹羅卡品可誘導(dǎo)小鼠癲癇發(fā)作和異常腦電圖改變。癲癇組小鼠較對(duì)照組小鼠，海馬內(nèi)microRNA-219水平顯著降低（降低70％），而皮質(zhì)中microRNA-219水平變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，海馬中CaMKⅡγ、NMDAR

4、1蛋白表達(dá)水平升高。癲癇患者腦脊液中microRNA-219水平較對(duì)照組也顯著降低;2.microRNA-219的特異性拮抗劑可誘導(dǎo)小鼠表現(xiàn)出癲癇發(fā)作癥狀和異常腦電圖表現(xiàn)。注射microRNA-219拮抗劑后，小鼠海馬內(nèi)microRNA-219水平顯著降低，海馬中CaMKⅡγ、NMDAR1蛋白表達(dá)水平升高;3.microRNA-219的特異性激動(dòng)劑可使KA誘導(dǎo)的癲癇小鼠癥狀明顯好轉(zhuǎn)，腦電圖皮層癇樣放電明顯受到抑制?？墒拱d癇小鼠海馬內(nèi)mi

5、croRNA-219恢復(fù)到正常水平，CaMKⅡγ、NMDAR1蛋白表達(dá)水平降低:4.NMDA受體的非競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑MK-801可顯著改善microRNA-219拮抗劑所誘導(dǎo)小鼠癲癇發(fā)作癥狀和異常腦電圖表現(xiàn)。
　　結(jié)論:在小鼠癲癇模型海馬和癲癇患者腦脊液中，microRNA-219表達(dá)水平顯著下降，microRNA-219可作為一種早期檢測(cè)癲癇類疾病的生物標(biāo)志物，microRNA-219通過(guò)調(diào)節(jié)CaMKⅡ/NMDA受體信號(hào)通路發(fā)揮著抑