跨膜區(qū)多肽的合成及相互作用機(jī)理的研究.pdf

1、本論文中我們首先通過(guò)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)搜索到不同物種的跨膜區(qū)的序列，找出保守型最強(qiáng)的跨膜區(qū)，分別是E.鈣粘蛋白的跨膜區(qū)(TM)和β2AR的第六跨膜區(qū)(TM-VI)。接下來(lái)我們采用TOXCAT方法分析跨膜區(qū)的二聚化，為了研究哪些殘基在二聚界面上發(fā)揮重要作用，又分別在一些相互作用序列模型中引入突變位點(diǎn)。我們采用Fmoc固相合成法，合成跨膜區(qū)多肽，利用圓二色譜(CD)研究其二級(jí)結(jié)構(gòu)，利用SDS-PAGE研究其聚集狀態(tài)。另外，我們采用計(jì)算機(jī)模擬的方

2、法，在模擬的脂質(zhì)雙分子層中研究其二聚化的過(guò)程，找出跨膜螺旋相互作用的界面。
　　 對(duì)于E.鈣粘蛋白的研究，通過(guò)TOXCAT分析的結(jié)果我們可以看出，插入跨膜片段的長(zhǎng)度對(duì)其二聚化程度有影響。另外，定點(diǎn)突變的結(jié)果顯示真正介導(dǎo)E.鈣粘蛋白跨膜區(qū)二聚化的作用模型是聚亮氨酸拉鏈區(qū)，而不是GxxxG作用模型，這一結(jié)論通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬的方法也得到驗(yàn)證。采用Fomc固相合成法合成跨膜區(qū)多肽，SDS- PAGE結(jié)果顯示其單體和二聚體條帶同時(shí)存在。對(duì)于

3、β2AR第六跨膜區(qū)的研究，通過(guò)TOXCAT分析的結(jié)果我們可以看出，插入跨膜片段的長(zhǎng)度對(duì)其二聚化也有一定的影響，跨膜區(qū)的長(zhǎng)度并不是越長(zhǎng)二聚強(qiáng)度越高。采用Fomc固相合成法合成TM-VI多肽，SDS-PAGE結(jié)果顯示其二聚體條帶的存在。通過(guò)定點(diǎn)突變分析，我們發(fā)現(xiàn)GxxxG作用模型的破壞并沒(méi)有使二聚強(qiáng)度降低很多，很可能該作用序列只是部分參與了跨膜區(qū)的二聚化，并不是其關(guān)鍵的作用位點(diǎn)。我們的計(jì)算機(jī)模擬的結(jié)果顯示模擬200ns后兩條跨膜螺旋并無(wú)明顯