信號肽對膜蛋白定位的影響.pdf

1、膜蛋白表達和定位一直是國內(nèi)外關注的難題，本文試圖從信號肽這方面著手探討此問題。本文研究的膜蛋白是存在于嗜堿菌膜上的一種小分子膜蛋白MrpF，屬于嗜堿菌的Mrp Na+/H+反向載體膜蛋白系統(tǒng)的一個成員。關于信號肽的研究始于20世紀60年代，信號肽可引導胞內(nèi)表達的蛋白轉(zhuǎn)移至周質(zhì)空間或胞外。信號肽包括三個區(qū)，即中間的疏水核心區(qū).(h區(qū))，C端的極性區(qū)(c區(qū))和N端的強極性區(qū)(n區(qū))。大腸桿菌中，由信號肽引導的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運主要有兩種方式：Sec

2、途徑和Tat途徑，也有的蛋白質(zhì)可以利用這兩種方式轉(zhuǎn)運。本文選取了Sec途徑中的MalE和PhoA信號肽，Tat途徑中的TorA信號肽，雙途徑中的FhuD信號肽，分別稱為S1、S2、S3和S4，用于本課題研究。
　　 本文從表達載體構(gòu)建、融合蛋白的誘導表達和帶有PhoA標簽的重組蛋白的酶活測定等方面展開研究。本文成功構(gòu)建15種重組質(zhì)粒。蛋白誘導表達顯示，帶有PhoA標簽的重組蛋白中，S2和S3對膜蛋白MrpF定位的超表達有影響；帶

3、有MBP標簽的重組蛋白中，S1對膜蛋白MrpF定位的超表達有影響；不帶標簽的重組蛋白中，S1和S3對不帶標簽的膜蛋白MrpF定位的超表達均有促進作用。全蛋白酶活檢測顯示，重組蛋白BL21/pCLE20、BL21/DCLE18和BL21/pCLE10的活性按倍數(shù)增加，重組蛋白BL21/pCLE12和BL21/pCLE16無活性。膜蛋白酶活檢測顯示，重組蛋白BL21/DCLE12、BL21/pCLE16和BL21/pCLE20活性很低。BL