沙棘黃酮提取及體外抑制人前列腺癌PC--3細(xì)胞作用研究.pdf

1、前列腺癌(prostate cancer)是目前嚴(yán)重危害全球男性健康的惡性腫瘤之一，隨著年齡增長，其發(fā)病率顯著提高，而現(xiàn)階段對于雄激素非依賴性前列腺癌缺乏有效的治療手段。沙棘（Hippophae rhamnoides Linn）為胡頹子科酸刺屬的灌木或小喬木，在中國作為藥食兩用作物具有廣泛的用途。本文以沙棘果渣為原料，響應(yīng)面優(yōu)化沙棘果渣總黃酮提取工藝，并對沙棘果渣黃酮初提物進(jìn)行純化，通過MTT法篩選出具有體外抑制人前列腺癌PC-3細(xì)胞增

2、殖作用的純化樣品，并闡述其可能的作用機(jī)理。本文研究結(jié)果如下:
　　(1)以總黃酮提取率為指標(biāo)，通過響應(yīng)面分析沙棘果渣總黃酮提取工藝，得到最終的優(yōu)化條件:提取溫度為60℃，料液比為1∶16，乙醇體積分?jǐn)?shù)為65％，提取時(shí)間60min，此條件下總黃酮提取率達(dá)到111.75％±2.64％。
　　(2)采用AB-8大孔樹脂純化沙棘果渣黃酮粗提物，通過比色法、高效液相色譜法測定各純化樣品總黃酮、槲皮素、異鼠李素、山奈素的含量，結(jié)果表明，

3、AB-8大孔樹脂可以有效富集沙棘果渣黃酮，其中S30樣品總黃酮含量最高，達(dá)到47.04％，S50樣品中總黃酮含量為25.41％;沙棘果渣黃酮主要以槲皮素、異鼠李素、山奈素黃酮糖苷組成，各純化樣品水解后這三種黃酮苷元含量顯著升高，其中，水解樣SH30中槲皮素、異鼠李素含量分別為2.98％、3.90％，SH50中槲皮素、異鼠李素、山奈素含量分別達(dá)到5.03％、19.54％、0.43％。
　　(3)采用體外雄激素非依賴性前列腺癌PC-3

4、細(xì)胞模型，通過MTT法篩選對PC-3細(xì)胞具有增殖抑制作用的樣品，結(jié)果表明，S10、S30、S50、SH30體外抑制PC-3細(xì)胞作用較差，不是理想的活性樣品;SH50樣品具有較強(qiáng)的體外抑制PC-3細(xì)胞增殖的作用，其作用PC-3細(xì)胞48h和72h的半抑制濃度值分別為43.09μg/mL和33.16μg/mL。
　　(4)通過比較槲皮素、異鼠李素、SH50樣品對PC-3細(xì)胞的抑制作用發(fā)現(xiàn)，槲皮素、異鼠李素是SH50具有體外抑制PC-3細(xì)

5、胞作用的主要因素。
　　(5)細(xì)胞劃痕和細(xì)胞形態(tài)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，25μg/mL的SH50作用PC-3細(xì)胞24h后即可顯著降低細(xì)胞的橫向遷移能力，同時(shí)SH50作用PC-3細(xì)胞后可使細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的凋亡特征。
　　(6)采用流式細(xì)胞技術(shù)、Western blot技術(shù)探究SH50對PC-3細(xì)胞細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響，結(jié)果表明，SH50可有效提高PC-3細(xì)胞凋亡率，具有較強(qiáng)的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用;并將細(xì)胞周期阻滯在G2/M

6、期，影響DNA合成并延緩細(xì)胞周期的進(jìn)行，從而抑制PC-3細(xì)胞增殖;同時(shí)SH50可通過上調(diào)Bax蛋白的表達(dá)量和下調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá)量來實(shí)現(xiàn)對PC-3細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　綜上所述，從沙棘果渣黃酮粗提物中純化得到的SH50樣品具有較強(qiáng)的體外抑制PC-3細(xì)胞增殖的作用，推測其可能的作用機(jī)制為誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、阻滯細(xì)胞周期在G2/M期以及調(diào)控Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)，這對于提高沙棘果渣的綜合利用率及開發(fā)沙棘抗前列腺癌產(chǎn)品提供了一定