TLR4和炎性細(xì)胞因子在大鼠液壓沖擊腦損傷的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：分析TLR4、NF-κB在液壓沖擊腦損傷的表達(dá)以及所介導(dǎo)的炎性反應(yīng)在繼發(fā)性腦損傷中的作用。
　　方法：成年、雄性SD大鼠64只，體重250g-350g，隨機(jī)分成3組：正常對照組(NC組)8只，不予以任何處理；假手術(shù)組(SO組)8只，麻醉后常規(guī)開顱，但不予以液壓沖擊；單純腦損傷組(BI組)48只，麻醉后常規(guī)開顱，僅行液壓沖擊制作腦損傷模型。
　　NC組和SO組大鼠于術(shù)后1h，BI組大鼠于傷后第1h、6h、12h、24h、

2、3d及7d分別按隨機(jī)原則選取8只，以10％水合氯醛麻醉，斷頭處死，開顱取腦，在損傷區(qū)前緣取100mg左右腦組織測腦組織含水量。經(jīng)損傷區(qū)切成3mm厚冠狀腦片，置于4％多聚甲醛固定液中固定24h后，常規(guī)進(jìn)行脫水、石蠟包埋處理，予以4μm切片，行HE染色、組織學(xué)觀察、應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法檢測TLR4、NF-κB、IL-6、IL-1β、TNF-α、ICAM-1。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠腦含水量測定與NC組比較，BI組傷后1h腦

3、含水量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，傷后6h腦含水量略有升高(79.36±1.847)，傷后12h則明顯升高(80.48±1.281，P<0.05)，24h至3d達(dá)到高峰(82.82±1.138，82.25±1.979，P<0.05.)，7d時(shí)降低(80.49±1.772，P<0.05)。
　　2.組織學(xué)觀察：BI組傷后6h可見損傷灶周圍腦組織開始出現(xiàn)細(xì)胞水腫，傷后12h細(xì)胞水腫較前明顯加重，傷后24h水腫范圍繼續(xù)明顯擴(kuò)大，細(xì)

4、胞水腫程度達(dá)高峰，并可見膠質(zhì)細(xì)胞增生，傷后3d仍然能夠觀察到周圍神經(jīng)細(xì)胞明顯水腫，但較24h時(shí)有所減輕，膠質(zhì)細(xì)胞增生卻較前明顯。傷后7d水腫基本減退，膠質(zhì)細(xì)胞仍增生明顯。
　　3.TLR4的表達(dá)免疫組化顯示TLR4主要在星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞膜上以及小膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。BI組TLR4的表達(dá)6h開始顯著增高(1.50±0.58，P<0.05)，12h繼續(xù)升高(3.50±0.58，P<0.05)，24h達(dá)到高峰(5.50±1

5、.00，P<0.05)，明顯高于NC組(P<0.05)，7d后降低(2.25±0.50，P<0.05)。
　　4.NF-κB的表達(dá)免疫組化結(jié)果顯示NF-κB在神經(jīng)細(xì)胞的胞漿和胞核中均有表達(dá)。BI組胞漿特別是胞核內(nèi)NF-κB表達(dá)顯著增高：1h時(shí)有所增加(1.75±0.50)，傷后6h開始顯著增高(4.50±1.00，P<0.05)，傷后24h時(shí)達(dá)高峰(8.25±1.50，P<0.05)，3d開始下降(4.25±1.26，P<0.05

6、)，7d后仍高于NC組(2.75±0.9，P<0.05)。而NC組和SO組NF-κB沒有或較少表達(dá)。
　　5.IL-6的表達(dá)BI組IL-6蛋白的表達(dá)6h開始增高(3.50±0.58，P<0.05)，12h繼續(xù)升高(5.00±1.15，P<0.05)，24h達(dá)到高峰(7.80±1.64，P<0.05)，3d后降低(3.25±0.96，P<0.05)。
　　6.IL-1β的表達(dá)BI組與NC組相比，IL-1β的表達(dá)6h到12h升高

7、(3.75±0.48，P<0.05)，24h達(dá)到高峰(7.80±1.64，P<0.05)，3d后降低，仍高于NC組(2.50±0.58，P<0.05)。
　　7.TNF-α的表達(dá)BI組與NC組相比，TNF-α的表達(dá)1h開始升高(3.50±0.58，P<0.05)，6h至12h達(dá)到高峰(5.75±2.36，7.50±1.73，P<0.05)，24h后降低，仍高于NC組(3.20±0.84，P<0.05)。
　　8.ICAM-1

8、的表達(dá)BI組與NC組相比，ICAM-1的表達(dá)6h開始增高(4.50±1.00)，12h繼續(xù)升高(5.50±1.58，P<0.05)，24h達(dá)到高峰(8.40±1.34，P<0.05)，3d后降低(2.56±0.58，P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.大鼠液壓沖擊傷后TLR4、NF-κB及炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α、ICAM-1的表達(dá)呈升高趨勢。
　　2.大鼠液壓沖擊傷后TLR4、NF-κB之間以及與炎