TLR4和炎性細胞因子在大鼠液壓沖擊腦損傷的作用及機制.pdf

1、目的：分析TLR4、NF-κB在液壓沖擊腦損傷的表達以及所介導的炎性反應在繼發(fā)性腦損傷中的作用。
　　方法：成年、雄性SD大鼠64只，體重250g-350g，隨機分成3組：正常對照組(NC組)8只，不予以任何處理；假手術組(SO組)8只，麻醉后常規(guī)開顱，但不予以液壓沖擊；單純腦損傷組(BI組)48只，麻醉后常規(guī)開顱，僅行液壓沖擊制作腦損傷模型。
　　NC組和SO組大鼠于術后1h，BI組大鼠于傷后第1h、6h、12h、24h、

2、3d及7d分別按隨機原則選取8只，以10％水合氯醛麻醉，斷頭處死，開顱取腦，在損傷區(qū)前緣取100mg左右腦組織測腦組織含水量。經損傷區(qū)切成3mm厚冠狀腦片，置于4％多聚甲醛固定液中固定24h后，常規(guī)進行脫水、石蠟包埋處理，予以4μm切片，行HE染色、組織學觀察、應用免疫組織化學染色方法檢測TLR4、NF-κB、IL-6、IL-1β、TNF-α、ICAM-1。
　　結果：
　　1.大鼠腦含水量測定與NC組比較，BI組傷后1h腦

3、含水量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，傷后6h腦含水量略有升高(79.36±1.847)，傷后12h則明顯升高(80.48±1.281，P<0.05)，24h至3d達到高峰(82.82±1.138，82.25±1.979，P<0.05.)，7d時降低(80.49±1.772，P<0.05)。
　　2.組織學觀察：BI組傷后6h可見損傷灶周圍腦組織開始出現細胞水腫，傷后12h細胞水腫較前明顯加重，傷后24h水腫范圍繼續(xù)明顯擴大，細

4、胞水腫程度達高峰，并可見膠質細胞增生，傷后3d仍然能夠觀察到周圍神經細胞明顯水腫，但較24h時有所減輕，膠質細胞增生卻較前明顯。傷后7d水腫基本減退，膠質細胞仍增生明顯。
　　3.TLR4的表達免疫組化顯示TLR4主要在星形膠質細胞和少突膠質細胞細胞膜上以及小膠質細胞細胞內表達。BI組TLR4的表達6h開始顯著增高(1.50±0.58，P<0.05)，12h繼續(xù)升高(3.50±0.58，P<0.05)，24h達到高峰(5.50±1

5、.00，P<0.05)，明顯高于NC組(P<0.05)，7d后降低(2.25±0.50，P<0.05)。
　　4.NF-κB的表達免疫組化結果顯示NF-κB在神經細胞的胞漿和胞核中均有表達。BI組胞漿特別是胞核內NF-κB表達顯著增高：1h時有所增加(1.75±0.50)，傷后6h開始顯著增高(4.50±1.00，P<0.05)，傷后24h時達高峰(8.25±1.50，P<0.05)，3d開始下降(4.25±1.26，P<0.05

6、)，7d后仍高于NC組(2.75±0.9，P<0.05)。而NC組和SO組NF-κB沒有或較少表達。
　　5.IL-6的表達BI組IL-6蛋白的表達6h開始增高(3.50±0.58，P<0.05)，12h繼續(xù)升高(5.00±1.15，P<0.05)，24h達到高峰(7.80±1.64，P<0.05)，3d后降低(3.25±0.96，P<0.05)。
　　6.IL-1β的表達BI組與NC組相比，IL-1β的表達6h到12h升高

7、(3.75±0.48，P<0.05)，24h達到高峰(7.80±1.64，P<0.05)，3d后降低，仍高于NC組(2.50±0.58，P<0.05)。
　　7.TNF-α的表達BI組與NC組相比，TNF-α的表達1h開始升高(3.50±0.58，P<0.05)，6h至12h達到高峰(5.75±2.36，7.50±1.73，P<0.05)，24h后降低，仍高于NC組(3.20±0.84，P<0.05)。
　　8.ICAM-1

8、的表達BI組與NC組相比，ICAM-1的表達6h開始增高(4.50±1.00)，12h繼續(xù)升高(5.50±1.58，P<0.05)，24h達到高峰(8.40±1.34，P<0.05)，3d后降低(2.56±0.58，P<0.05)。
　　結論：
　　1.大鼠液壓沖擊傷后TLR4、NF-κB及炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α、ICAM-1的表達呈升高趨勢。
　　2.大鼠液壓沖擊傷后TLR4、NF-κB之間以及與炎