去盆腔神經(jīng)支配對(duì)大鼠結(jié)腸粘膜TRPV1和5-HT4受體表達(dá)的影響.pdf

1、背景:
　　近年來，盆腔神經(jīng)損傷導(dǎo)致腸道功能障礙的研究逐漸引起人們的關(guān)注。臨床上觀察到隨著時(shí)間推移部分病人的癥狀有逐步改善的趨勢(shì)，但機(jī)制尚不清楚，所以闡明其代償恢復(fù)的機(jī)制對(duì)今后的治療研究有重要意義。
　　盆腔神經(jīng)損傷后，結(jié)直腸功能主要依賴腸神經(jīng)系統(tǒng)(enteric nervous system，ENS)進(jìn)行代償。研究發(fā)現(xiàn)，腸粘膜內(nèi)腸嗜鉻（enterochromaffin，EC）細(xì)胞感受腸腔內(nèi)的機(jī)械化學(xué)刺激，并釋放5-羥色胺（

2、5-hydroxytryptamine，5-HT）是ENS調(diào)節(jié)結(jié)直腸動(dòng)力的重要機(jī)制。TRPA1是腸EC細(xì)胞的重要感受器分子，可激活EC細(xì)胞釋放5-HT。5-HT可與粘膜下的末梢神經(jīng)上的相應(yīng)受體結(jié)合從而發(fā)揮調(diào)控腸動(dòng)力的作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn)TRPA1在去盆腔神經(jīng)支配(pelvic nerve denervation，PND)大鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸粘膜上的蛋白表達(dá)與腸動(dòng)力恢復(fù)趨勢(shì)是相一致的，提示TRPA1在PND大鼠結(jié)腸動(dòng)力適應(yīng)性恢復(fù)中發(fā)揮重要作用。

3、
　　腸道粘膜上的另一感受器分子TRPV1，可以感知腸腔內(nèi)的機(jī)械化學(xué)刺激及炎性疼痛，不僅與TRPA1共表達(dá)，并在功能上存在相互協(xié)同。研究發(fā)現(xiàn)TRPV1在小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸內(nèi)臟敏感性及運(yùn)動(dòng)功能調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。所以，是否TRPV1也參與盆腔神經(jīng)損傷后結(jié)腸動(dòng)力的適應(yīng)性恢復(fù)引起我們的關(guān)注。
　　5-HT是腸道重要的信號(hào)分子，在消化道的感覺、運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。已知5-HT4受體廣泛分布于ENS末梢的內(nèi)在初級(jí)傳入神經(jīng)元(intrin

4、sic primary afferentneurons，IPANs) IPANs，在PND大鼠，失去了外來神經(jīng)的支配后，EC細(xì)胞釋放的5-HT是否更多地與IPANs上的5-HT4受體結(jié)合從而發(fā)揮代償作用，這尚不清楚。所以5-HT4受體也成為我們此次研究的關(guān)鍵之一。
　　目的:
　　1、觀察TRPV1在PND大鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸粘膜中的表達(dá)變化，研究其在PND大鼠結(jié)腸動(dòng)力恢復(fù)中的作用;
　　2、觀察5-HT4受體在PND大鼠遠(yuǎn)端

5、結(jié)腸粘膜中的表達(dá)情況，探討其在PND大鼠結(jié)腸動(dòng)力恢復(fù)中的作用。
　　方法:
　　將72只成年大鼠隨機(jī)分成PND組、假手術(shù)組2組。免疫組織化學(xué)染色、Western blot檢測(cè)大鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸粘膜術(shù)后1、3、7天的TRPV1、5-HT4受體蛋白表達(dá)，實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time Quantitative PCR，RT-qPCR)檢測(cè)TRPV1、5-HT4受體在大鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸粘膜術(shù)后1、3、7天的mRNA水平。
　　結(jié)果:

6、
　　1.TRPV1表達(dá)情況
　　(1)免疫組化染色結(jié)果顯示:與假手術(shù)組相比，PND大鼠術(shù)后第1天遠(yuǎn)端結(jié)腸粘膜TRPV1免疫陽性表達(dá)顯著減少，術(shù)后第3、7天逐步增加;
　　(2)Western blot檢測(cè)結(jié)果:與假手術(shù)組相比，PND大鼠術(shù)后第1天遠(yuǎn)端結(jié)腸粘膜TRPV1蛋白表達(dá)顯著下調(diào)，術(shù)后第3、7天逐步恢復(fù);
　　(3)RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果:與假手術(shù)組相比，術(shù)后第1天的PND大鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸粘膜TRPV1 mRN

7、A水平顯著降低，術(shù)后第3、7天逐步上調(diào)。
　　2.5-HT4受體表達(dá)情況
　　(1)免疫組化染色結(jié)果顯示:與假手術(shù)組相比，PND大鼠術(shù)后第1天遠(yuǎn)端結(jié)腸粘膜5-HT4受體免疫陽性表達(dá)顯著減少，術(shù)后第3、7天逐步增加;
　　(2)Western blot檢測(cè)結(jié)果:與假手術(shù)組相比，PND大鼠術(shù)后第1天遠(yuǎn)端結(jié)腸粘膜5-HT4受體蛋白表達(dá)顯著下調(diào)，術(shù)后第3、7天逐步恢復(fù);
　　(3)RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果:與假手術(shù)組相比，