石決明水提液對白內(nèi)障大鼠晶狀體上皮細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激影響的研究.pdf

1、本課題是通過研究D-半乳糖誘導白內(nèi)障大鼠晶狀體上皮細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激機制，進一步探究石決明水提液對白內(nèi)障大鼠晶狀體的防護作用。第一部分是前期準備，第二部分是用免疫組織化學、Western blot和RT-PCR方法分別來說明石決明水提液對白內(nèi)障大鼠晶狀體上皮細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的影響。
　　 第一部分:前期準備
　　 目的:
　　 制作D-半乳糖誘導白內(nèi)障大鼠模型及用藥，為下一部實驗做準備。
　　 方法:
　

2、　 1實驗分組:健康SD大鼠100只，雙眼為實驗眼（共200枚晶狀體），鼠齡為40天，體重在200±10 g左右，隨機平均分為4組:空白組、模型組、白內(nèi)停組、石決明組。
　　 2模型制作:D-半乳糖誘導白內(nèi)障大鼠模型制作[2]。
　　 3用藥:空白組、模型組用生理鹽水點眼，石決明組用石決明水提液點眼，白內(nèi)停組用白內(nèi)停滴眼液點眼，3次/天，1滴/次。
　　 4取材:第15天處死所有大鼠，在無菌操作下，分組取出大鼠

3、晶狀體并凍存于-80℃冰箱中備用。
　　 結(jié)果:
　　 第15天散瞳觀察大鼠晶狀體，參考祁明信、黃秀榕等的晶狀體混濁分期標準[3]，其中模型組晶狀體的混濁達到了Ⅱ期。白內(nèi)停組與石決明組晶狀體混濁程度比模型組輕，晶狀體的混濁程度達到了Ⅰ期。空白組的晶狀體透明。
　　 結(jié)論:
　　 石決明水提液能夠減輕晶狀體的混濁程度，延緩白內(nèi)障的發(fā)展。
　　 第二部分:免疫組織化學、Western blot和RT-

4、PCR方法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激中CHOP，GRP78，XBP-1mRNA的表達
　　 目的:
　　 為了進一步探究石決明水提液對白內(nèi)障大鼠晶狀體的防護作用。
　　 方法:
　　 將取出的大鼠晶狀體（空白組、模型組、白內(nèi)停組、石決明組）分別用免疫組織化學方法檢測CHOP（C/EBP homologous protein，C/EBP同源蛋白）的表達，用Western blot方法檢測GRP78（78-kDa glu

5、cose-regulated protein,78-kDa糖調(diào)節(jié)蛋白）的表達，用RT-PCR方法檢測XBP-1 mRNA(X-box binding protein1，X盒結(jié)合蛋白1 mRNA)的表達。
　　 結(jié)果:
　　 1免疫組織化學方法檢測大鼠晶狀體上皮細胞CHOP的表達:
　　 由免疫組化染色所見，陽性表達為細胞膜和/或細胞質(zhì)有呈棕黃色的顆粒，則呈陽性表達（圖1）。模型組的陽性表達率92.62±2.32％

6、，石決明組的陽性表達率44.72±3.51％，白內(nèi)停組的陽性表達率45.77±4.54％，空白組的陽性表達率5.74±3.20％（表1）。石決明組的陽性表達率小于模型組(P＜0.05);石決明組的陽性表達率與白內(nèi)停組無明顯差異(P＞0.05);模型組的陽性表達率大于空白組(P＜0.01)。
　　 2 Western blot方法檢測大鼠晶狀體上皮細胞GRP78的表達:
　　 模型組陽性表達0.556±0.16μg/ml，

7、石決明組的陽性表達0.212±0.15μg/ml，白內(nèi)停組的陽性表達0.321±0.26μg/ml，空白組的陽性表達0.013±0.21μg/ml(表2)。石決明組的陽性表達率小于模型組(P＜0.05);石決明組的陽性表達率與白內(nèi)停組無明顯差異(P＞0.05);模型組的陽性表達率大于空白組(P＜0.01)。
　　 3 R-PCR方法檢測大鼠晶狀體上皮細胞XBP-1mRNA的表達:
　　 模型組陽性表達9.2±0.04，石