手術(shù)減壓對大鼠脊髓撞擊并壓迫模型的神經(jīng)細(xì)胞自噬與凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　觀察手術(shù)減壓對大鼠脊髓撞擊并壓迫模型的脊髓組織細(xì)胞自噬與凋亡的影響，探討手術(shù)減壓促進(jìn)脊髓功能恢復(fù)的機(jī)制。
　　方法：
　　清潔級Sprague-Dawley大鼠72只，體重250～300g，按隨機(jī)數(shù)字表法分為持續(xù)壓迫組（n＝24）、手術(shù)減壓組（n＝24）、假手術(shù)組（n＝24）。采用Allen’s法＋自制壓迫件置入椎管造成脊髓急性損傷合并椎管內(nèi)占位，各組分別在造模后8h、24h、3d、7d取材。采用BBB評分

2、法評估大鼠后肢運(yùn)動功能變化，RTFQ-PCR檢測樣本Beclin-1mRNA和Bcl-2mRNA表達(dá)，免疫熒光法檢測自噬相關(guān)蛋白LC3的表達(dá)，活性檢測試劑盒測定半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶-3（Caspase-3）的活性。
　　結(jié)果：
　　1、BBB評分：持續(xù)壓迫組和手術(shù)減壓組SD大鼠脊髓損傷后3d始見下肢活動，兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；造模后7d手術(shù)減壓組大鼠BBB評分高于持續(xù)壓迫組(P<0.05)；假手術(shù)組大鼠BBB評分在術(shù)

3、后8h、24h、3d、7d相互間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2、熒光定量PCR結(jié)果
　　2.1在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，持續(xù)壓迫組和手術(shù)減壓組大鼠脊髓組織Beclin-1mRNA表達(dá)水平均較假手術(shù)組升高(P<0.05)，持續(xù)壓迫組高于手術(shù)減壓組(P<0.05)。
　　2.2損傷后24h、3d、7d，手術(shù)減壓組大鼠脊髓組織Bcl-2mRNA表達(dá)水平高于持續(xù)壓迫組(P<0.05)。
　　3、免疫熒光染色：熒光顯微鏡下觀察到LC3在持

4、續(xù)壓迫組和手術(shù)減壓組神經(jīng)細(xì)胞中均有較高表達(dá)。在各對應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，手術(shù)減壓組LC3陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)低于持續(xù)壓迫組(P<0.05)。
　　4、Caspase-3活性檢測結(jié)果：手術(shù)減壓組Casepase-3活性在損傷后8h、24h、3d、7d較持續(xù)壓迫組均降低(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、脊髓損傷后，自噬在神經(jīng)細(xì)胞中的表達(dá)升高，手術(shù)減壓可以使脊髓損傷后細(xì)胞自噬的表達(dá)下降。
　　2、脊髓損傷后，凋亡在神經(jīng)細(xì)胞中的表達(dá)增